PAR4、类胰蛋白酶和nNOS在IBS-D患者直肠粘膜肥大细胞的表达及意义

摘要

目的:
　　研究蛋白酶激活受体4（PAR4）、类胰蛋白酶和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）在腹泻型肠易激综合征（IBS-D）患者直肠粘膜肥大细胞（MC）的表达和MC的变化，探讨它们在肠易激综合征（IBS）内脏高敏感发病机制中的作用，从而加深对IBS-D的认识，以期进一步揭示IBS-D患者内脏高敏感的发病机理。
　　方法:
　　选择30位符合罗马Ⅲ诊断标准的IBS-D病人作为实验组，选择28位健康体检者作为正常对照组。肠镜检查时于距离肛门10-15厘米直肠处钳取粘膜组织4块，4％多聚甲醛固定，冰冻连续切片，依次进行以下几部分实验：（1）采用甲苯胺蓝染色法分别计数两组直肠粘膜MC数量；（2）采用免疫组化方法分别计数两组直肠粘膜类胰蛋白酶表达阳性的MC数量、脱颗粒数量；（3）采用免疫组化方法分别计数两组直肠粘膜蛋白酶激活受体4（PAR-4）表达阳性的MC的数量；（4）采用免疫组化方法分别计数两组直肠粘膜表达神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的MC的数量。
　　结果:
　　1、甲苯胺蓝染色技术发现：直肠粘膜的MC数量在IBS-D病人组为（12.80±1.35）个/高倍视野，健康对照组为（7.57±0.79）个/高倍视野，二者统计显示（t=18.15， p=0.000<0.01），具有显著性差异。
　　2、免疫组化技术发现：直肠粘膜类胰蛋白酶表达阳性的MC数量在IBS-D病人组为（12.13±3.08）个/高倍视野，健康对照组为（7.43±0.57）个/高倍视野，二者统计显示（t=8.21，p=0.000<0.01），具有显著性差异。IBS-D病人直肠粘膜的脱颗粒MC数量为（6.20±0.76）个/高倍视野，健康对照组为（1.82±0.77）个/高倍视野，二者统计显示（t=21.74，p=0.000<0.01），具有显著性差异。
　　3、免疫组化技术发现：直肠粘膜上PAR4表达阳性的MC数量在IBS-D病人组为（7.20±2.07）个/高倍视野，健康对照组为（2.04±0.92）个/高倍视野，二者统计显示（t=12.39，p=0.000<0.01），具有显著性差异。本实验环节证实在IBS-D患者的直肠粘膜上PAR4表达升高。
　　4、免疫组化技术发现：直肠粘膜上nNOS表达阳性的MC数量在IBS-D病人组为（7.63±0.81）个/高倍视野，健康对照组为（2.14±0.76）个/高倍视野，二者统计显示（t=26.66，p=0.000<0.01），具有显著性差异。本实验环节证实在 IBS-D患者的直肠粘膜上nNOS表达升高。
　　结论:
　　1、IBS-D病人与健康对照组直肠粘膜的MC分布以粘膜固有层居多，IBS-D病人直肠粘膜的MC数量较健康对照组增多，IBS-D病人直肠粘膜类胰蛋白酶表达阳性的MC较健康对照组增多，且脱颗粒增多，推测MC及类胰蛋白酶与IBS-D内脏高敏感的发生密切相关。
　　2、PAR4在人体直肠粘膜的MC有表达，IBS-D病人直肠粘膜PAR4表达为阳性的MC数量较健康对照组增多，提示IBS的发生可能与PAR4增多，而MC的功能增强有关，我们推测可能是由于PAR4和肥大细胞功能的不平衡引起IBS-D持续性的内脏高敏感性。
　　3、nNOS在人体直肠粘膜的MC有表达，IBS-D病人直肠粘膜nNOS表达为阳性的MC数量较健康对照组显著增多，由此我们推测nNOS可能和IBS-D的发生密切相关。

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封面

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中文摘要

英文摘要

符号说明

前言

材料与方法

一、标本的搜集与处理

二、主要试剂和主要仪器

三、实验方法和实验步骤

四、统计学分析

结果

1、MC在IBS-D患者和健康对照组直肠粘膜的表达

2、类胰蛋白酶表达阳性的MC在IBS-D患者和健康对照组直肠粘膜的表达

3、PAR4表达阳性的MC在IBS-D患者和健康对照组直肠粘膜的表达

4、nNOS表达阳性的MC在IBS-D患者和健康对照组直肠粘膜的表达

讨论

1、直肠粘膜组织MC的表达

2、类胰蛋白酶表达阳性的MC在肠道粘膜组织的表达

3、PAR4表达阳性的MC在肠道粘膜组织的表达

4、nNOS阳性的MC在肠道粘膜组织的表达

结论

参考文献

综述肥大细胞、一氧化氮合酶及PAR4与IBS内脏高敏感关系的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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