鸡传染性支气管炎疫苗免疫后IHA抗体与HI抗体的比较研究

摘要

鸡传染性支气管炎（IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种仅发生于鸡的急性、高度接触性的呼吸道疾病。该病在我国的流行趋势逐步上升，尤其是肾病变型 IB 已蔓延至全国各地，造成了严重的经济损失。目前用于评价鸡传染性支气管炎疫苗免疫效果的抗体检测方法主要是血凝抑制试验（HI）。HI 试验所用的血凝素（HA）抗原需用胰蛋白酶或磷脂酶 C 处理制备，这一过程破坏 IBV的纤突蛋白，不能真实反映 IBV 抗体水平。此外，IBV 的血清型众多，各血清型之间的差异很大，因此，使用HI试验评价不同血清型IBV疫苗免疫后的抗体水平受到了质疑。本研究旨在建立将IBV全病毒吸附于鸡红细胞载体上的间接血凝试验（IHA）方法，并通过与HI比较特异性、敏感性，检测W93和M41抗原的交叉关系及田间免疫血清抗体水平来确定IHA抗体与HI抗体之间的差异。通过使用建立的IHA方法和HI方法来检测IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株灭活苗免疫后鸡血清中抗体水平，阐明不同血清型疫苗免疫鸡群IHA抗体与HI抗体的变化规律。试验结果如下： 1.建立了检测血清中IBV抗体的IHA方法。将IBV不同毒株接种10日龄非免疫鸡胚，48 h后收获尿囊液，经0.2%甲醛灭活后获得IBV灭活病毒液。IHA抗原制备是将IBV灭活病毒液与2.5%鞣酸鞣化的鸡红细胞按1:2混匀，致敏1 h，检测IBV阳性血清的IHA效价可达28。HA抗原制备是用IBV灭活病毒液经1%胰酶处理制成，胰酶与抗原最佳比例为1:3，处理抗原的最佳时间是2 h，检测IBV阳性血清的血凝价（HA）可达28-29。 2.建立的IHA方法和HI方法均具有实用性。用建立的IHA方法和HI方法分别检测IBV的W93株阳性血清、M41株阳性血清及IBV阴性血清，禽流感（AI）H9、禽流感（AI）H5、新城疫（ND）、传染性法氏囊病（IBD）、产蛋下降综合征（EDS-76）等病毒性的阳性血清。结果表明，用 IBV的 W93和M41 毒株制备的抗原建立的 IHA和HI方法特异性良好。分别用IHA和HI方法检测10份免疫鸡血清，结果显示IHA效价在26～28，HI的效价在28～29，表明HI效价比IHA方法高2～4倍。用W93和M41制成的IHA抗原和HA抗原对6份疫苗免疫鸡血清分别进行IHA和HI抗体检测，IBV的W93株和M41株的HI结果完全一致，而IHA试验结果存在1～2倍抗体滴度的差异。 3.IBV不同疫苗免疫鸡群中IHA和HI抗体消长规律存在差异。用IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株灭活苗分别免疫健康雏鸡，免疫后不同时间（7、14、21、28、35、42 d）采血分离血清，用IHA和HI试验检测免疫鸡血清抗体的消长规律。结果显示W93和M41活疫苗免疫后抗体维持时间短，峰值不高，而M41株灭活苗免疫后，抗体水平峰值虽然不高，但维持时间较长。 总体而言，虽然IHA和HI均可用于鸡传染性支气管炎疫苗免疫后的效果评价，但HI试验检测抗体个体差异小，IHA试验检测抗体个体差异较大。

目录

声明

第一章 鸡传染性支气管炎病毒研究进展

1.1 鸡传染性支气管炎病毒概述

1.1.1 病原学

1.1.2 鸡传染性支气管炎病毒的理化特性

1.1.3 鸡传染性支气管炎病毒的培养特性

1.1.4 鸡传染性支气管炎病毒的分型

1.1.5 鸡传染性支气管炎的流行病学特点

1.2 鸡传染性支气管炎临床症状

1.2.1 呼吸型

1.2.2 肾病变型

1.2.3 腺胃病变型

1.2.4 肠病变型

1.3 病理变化

1.3.1 眼观病变

1.3.2 组织学变化

1.4鸡传染性支气管炎疫苗研究进展

1.4.1 弱毒疫苗

1.4.2 灭活疫苗

1.4.3 基因工程疫苗

1.5 鸡传染性支气管炎诊断方法研究进展

1.5.2 血清学试验

1.5.3 分子生物学技术

1.6 本研究的目的意义

第二章 鸡传染性支气管炎疫苗免疫后IHA抗体与HI抗体的比较研究

2.1 材料

2.1.1 IBV疫苗、阳性血清，鸡胚、成年鸡和雏鸡

2.1.2 主要仪器设备电子天平

2.1.3 主要试剂

2.1.4 试验用主要溶液配制

2.2 方法

2.2.1 IHA方法的建立

2.2.2 IHA方法条件的优化

2.2.3 HI方法的建立

2.2.4 IBV HI试验抗原制备条件的优化

2.2.5 IHA方法和HI方法的特异性试验

2.2.6 IHA方法和HI方法的敏感性试验

2.2.7 毒株间的IHA和HI的交叉试验

2.2.8 应用IHA和HI方法检测田间血清IBV抗体效价

2.2.9 不同疫苗免疫鸡血清中的HI抗体和IHA抗体水平的比较

2.3 结果

2.3.1 IHA方法条件的优化

2.3.2 HI方法条件的优化

2.3.3 IHA方法和HI方法的特异性试验结果

2.3.4 IHA方法和HI方法的敏感性试验结果

2.3.5 IBV不同血清型毒株间IHA和HI的交叉试验

2.3.6 田间血清中的HI抗体和IHA抗体效价检测结果

2.3.7 不同疫苗免疫鸡血清中的HI抗体和IHA抗体水平

2.4 讨论

结论

参考文献

致谢

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