雌激素膜受体GPR30在山羊发情周期不同阶段卵巢中的表达与定位

摘要

卵巢是雌性哺乳动物生殖系统中最主要的器官之一，在神经系统和下丘脑-垂体-性腺轴激素的调节下，能够周期性产生卵子并分泌比例均衡的生殖激素（毛文智 2007）；卵巢上卵泡与黄体周期性的交替变化，调节动物的全部生殖生理过程。雌激素是与动物繁殖直接相关的生殖激素，参与调控哺乳动物的发情和性行为(Eric R et al. 2014)。雌激素是一类化学结构相似，分子中含有18个碳原子的类固醇激素，通过结合雌激素受体发挥其生理作用。雌激素核受体（estrogen receptors, ERs）是发现较早的雌激素受体，包括雌激素受体α（estrogen receptorα, ERα）和雌激素受体β（estrogen receptorβ, ERβ）两种亚型，ERs定位于细胞核，通过调节靶基因的转录而发挥基因调节作用(安胜军,张永祥 2002)。但越来越多的证据显示，ERs并不足以完成雌激素的全部作用，在某些条件下，雌激素的作用极快，这表明雌激素还存在一种快速的非基因组的调节作用。近年来的研究发现，在许多类型细胞的细胞膜上，存在一种G蛋白耦联的受体30 （G protein-coupled receptor 30, GPR30），这种膜受体能够介导雌激素的快速非基因组效应（Prossnitz and Barton 2011）。 本实验室前期的研究发现在山羊卵丘-卵母细胞复合体上存在着GPR30的表达，在卵母细胞体外成熟培养过程中，培养基中添加GPR30的激动剂或抑制剂对卵母细胞成熟进程有着不同的影响，因此推断GPR30在卵母细胞成熟过程中发挥着重要的作用。为了进一步证明GPR30在山羊发情周期和卵母细胞成熟过程中的作用，本研究主要通过检测GPR30在山羊发情周期不同阶段卵巢中的表达与定位，并进一步检测GPR30在不同发育阶段卵泡、黄体以及闭锁卵泡中的表达规律，为GPR30在卵巢周期调控、卵泡发育和卵母细胞成熟中的作用研究奠定基础。 本研究利用石蜡切片和H.E.染色结合卵巢外部结构观察，根据卵巢表面卵泡和黄体发育情况以及H.E.染色结果，判断山羊卵巢所处的发情周期，利用免疫组织化学法检测GPR30在发情周期不同阶段山羊卵巢，不同发育阶段卵泡、黄体和闭锁卵泡中的表达与定位，并利用实时定量PCR技术检测不同发育阶段卵泡中GPR30 mRNA表达规律。研究工作取得以下结果： （1）根据卵巢表面卵泡和黄体发育情况以及H.E.染色结果证明，发情周期不同阶段的卵巢有着不同的外部结构，根据卵巢发情周期不同阶段典型外部结构特征，可初步判断卵巢所处的发情周期阶段。 （2）卵巢组织免疫组化检测结果表明，GPR30免疫反应阳性产物广泛分布于发情周期不同阶段山羊卵巢组织中，主要定位于卵泡和黄体组织中。 （3）卵巢组织免疫组化检测结果表明，在卵巢中不同发育阶段的卵泡均有GPR30阳性表达，主要定位于颗粒细胞、卵丘细胞及卵母细胞质膜和胞质；分离卵泡的实时定量PCR检测结果表明，原始卵泡中GPR30 mRNA表达量最低，随着卵泡的生长发育，GPR30 mRNA在卵泡中表达水平逐渐升高，到成熟卵泡阶段表达量达到最高。 （4）卵巢组织免疫组化检测结果表明，间情期黄体中均有GPR30阳性表达，但表达强度较弱，且不同发育阶段黄体中GPR30的表达强度没有显著差异，GPR30主要定位于黄体细胞的胞质中，且在黄体组织中广泛分布。 （5）卵巢组织免疫组化检测结果表明，闭锁卵泡内卵母细胞和颗粒细胞也有GPR30阳性表达，与正常卵泡相比，GPR30表达水平较低。

目录

第一章 发情周期卵巢结构与功能的动态变化

1.1 发情周期中卵巢外部结构

1.2 发情周期中卵泡的动态发育及调节

1.3 发情周期中黄体的发育及调节

第二章 雌激素及其受体与卵巢功能调节研究进展

2.1 雌激素

2.2 雌激素核受体

2.3 雌激素膜受体

第三章 GPR30在不同发情周期阶段山羊卵巢中的表达与定位

3.1 材料与方法

3.2 结果与分析

3.3 讨论

3.4 小结

第四章 GPR30在不同发育阶段山羊卵泡中的表达与定位

4.1 材料与方法

4.2 结果与分析

4.3 讨论

4.4 小结

第五章 GPR30在不同发育阶段山羊黄体中的表达与定位

5.1 材料与方法

5.2 结果与分析

5.3 讨论

5.4 小结

第六章 GPR30在闭锁卵泡中的表达与定位

6.1 材料与方法

6.2 结果与分析

6.3 讨论

6.4 小结

参考文献

致谢

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