百合(Lilium)茎尖超低温保存新技术的建立与超低温疗法脱毒、病毒检测研究

摘要

百合是多年生鳞茎植物，属百合科 (Liliaccae) 百合属 (Lilium) 植物。种质资源保存为新品种选育和遗传改良提供了基因资源。病毒病害是制约百合生产的关键因素之一。病毒检测是病毒病防治、无毒苗生产和海关检验检疫的必备技术。本研究以百合试管苗为试材，旨在（1）创建百合茎尖超低温保存的新技术，为百合种质资源超低温基因库的建立提供了技术平台；（2）初步建立了百合茎尖超低温疗法脱毒技术；（3）建立百合病毒的 TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样 RT-PCR (microtissue direct RT-PCR, MD RT-PCR)和免疫组织化学定位法等多种病毒检测技术。本研究主要结果如下： 1. 以‘西伯利亚’百合(Lilium Oriental hybrid‘Siberia’) 为试材，建立了带不定芽叶片小块超低温保存技术。将百合的叶片外植体培养在不定芽诱导培养基上，培养12天后，从叶片外植体上切取至少携带一个不定芽的叶方形小块 (Small leaf squares，SLS，3×4 mm)。将 SLSs 培养在含有0.5 M蔗糖的预培养基上培养1天，用有加载溶液处理20分钟，随后在0℃条件下，将加载处理过的SLSs用PVS2溶液脱水7小时。将材料置于铝箔条上，直接投入液氮保存。液氮保存1个小时后，将材料取出，立即投入含有1.2M蔗糖的卸载液之中复温及解冻20分钟。解冻后的材料培养在再生培养基上，这种方法超低温保存后的成活率为85%，再生率为72%。 2. 以感染黄瓜花叶病(Cucumber mosaic virus, CMV) 的L.Oriental hybrid‘Siberia’, L. Asiatic hybrids‘Elite’和L. longiflorum Oriental‘Triumphator’ 为试材，利用小滴玻璃化法超低温处理茎尖，三个材料的生活率分别为95%，73%和60%，再生率分别85%， 72%和43%。超低温疗法对CMV的脱毒率初步检测结果分别为85%、80%和73%，上述结果待进一步确定待测定。 3. 以带 CMV 的‘西伯利亚’百合(L.Oriental hybrid ‘Siberia’) 为试材，建立了TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样 RT-PCR (MD RT-PCR)和免疫组织化学定位法技术。MD RT-PCR和RT-PCR的灵敏性一致。 上述研究为建立百合种质资源超低温基因库搭建了技术平台，为百合无毒苗生产开辟新途径，百合病毒病检测提供了新技术。

目录

第一章 文献综述

1.1 百合种植资源的重要性及传统保存技术

1.2 百合茎尖的超低温保存研究---现状及挑战

1.3 病毒病害对百合生产的影响，脱毒技术及病毒的检测技术

1.4本研究的目的及意义

第二章 百合茎尖超低温保存新技术的建立与超低温疗法脱毒

2.1 试验材料

2.2 主要药品及仪器

2.3 试验方法

2.4结果与分析

2.5 讨论

第三章 百合黄瓜花叶病毒（Cumcumber mosaicvirus,CMV）的检测技术研究

3.1 试验材料

3.2 主要药品及仪器

3.3 试验方法

3.4结果与分析

3.5讨论

第四章 结论与创新点

4.1结论

4.2 创新点

参考文献

缩略词

致谢

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