比率荧光光谱仪测量细胞内游离钙离子浓度的研究

摘要

新的荧光染料的开发和成像技术的发展,极大的促进了对细胞内钙信号传导途径的研究.该文前半部分简要回顾了Ca<'2+>荧光测量方法的历史与发展,介绍了Ca<'2+>作为细胞内第二信使的作用机理及对细胞内Ca<'2+>浓度进行荧光测量的原理并对我们的实验系统做了简洁的说明.该文后半部分主要围绕用比率荧光光谱仪测量细胞内游离Ca<'2+>的研究进行了以下工作:(1)建立了比率荧光光谱仪测量细胞内游离钙离子浓度的实验系统;(2)建立了乳鼠心肌细胞原代培养的模型,并对培养细胞进行了细胞内Ca<'2+>浓度的测量.在心肌细胞外液中加入NE(去钾肾上腺素)后测得的相对荧光强度明显升高,该现象符合NE的生理作用特点,因而表明我们所建立的测量细胞内Ca<'2+>浓度动态变化的心肌细胞实验系统是可行的.(3)通过用Fura-2/AM对B16细胞内Ca<'2+>浓度的测量,确定了B16细胞的制备及荧光染料的载入方法;建立了用随机软件ImageMaster获取被测细胞的图象及进行比率分析的方法,用随机软件FeliX获取被测细胞的荧光图谱及进行比率分析的方法.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明

第一章引言

1.1研究目的和意义

1.2目前常用的钙离子浓度的荧光测量方法

1.2.1荧光分光光度计法

1.2.2流式细胞仪法

1.2.3荧光显微镜法

1.2.4 CLSM(激光扫描共聚焦显微镜）法

1.2.5多光子激光扫描共聚焦显微镜法

1.2.6比率荧光成像光谱仪法

参考文献

第二章细胞内第二信使—钙离子的信号转导原理

2.1钙信号分子的特点

2.2 Ca2+信号系统及其细胞功能

参考文献

第三章荧光测量

3.1 Ca2+的荧光测量

3.1.1 Ca2+荧光指示剂

3.1.2 Ca2+生物发光指示剂：水母发光蛋白

3.1.3荧光测量法中Ca2+荧光指示剂的装载方法

3.1.4 Ca2+浓度的计算公式

3.2荧光分析的影响因素

参考文献

第四章实验系统

4.1比率荧光成像光谱仪

4.1.1显微镜系统

4.1.2光源部分、光纤、滤光片

4.1.3检测部分(增强型CCD照相机)

4.1.4系统参数

4.1.5系统软件

4.2 Ca2+荧光指示剂Fura-2

4.2.1 Fura-2的特点

4.2.2 Fura-2的应用

4.2.3影响Fura-2测定[Ca2+]i的因素

4.3细胞的培养与制备

4.3.1 K562细胞的培养及制备

4.3.2 B16细胞的制备

4.3.3乳鼠心肌细胞的原代培养

参考文献

第五章用比率荧光光谱仪进行细胞内Ca2+浓度测量的方法初探

5.1 Fura-2/AM用于K562细胞内Ca2+浓度的测量

5.2 Fura-2/AM用于乳鼠心肌细胞内Ca2+浓度的测量

5.3 Fura-2/AM用于B16细胞内Ca2+浓度测量的参数筛选

5.4展望

参考文献

致谢