Real Time PCR评价血液制品中指示病毒灭活去除效率的模型建立

摘要

本研究以戊二醛聚合猪血红蛋白模拟血液制品，选取PRV、PPV分别作为血液制品中有包膜DNA指示病毒和无包膜DNA指示病毒，针对特定两种指示病毒PRV、PPV，进行了生物信息学分析，选取特定片段作为扩增靶点进行检测，建立了一种基于实时荧光定量PCR技术的检测方法，联合病毒的细胞感染力实验，用以评价血液制品中指示病毒的灭活去除效率。初步建立了一种新的病毒去除方法，利用物理吸附将针对指示病毒的抗血清偶联至微米级的金磁颗粒，利用偶联至金磁颗粒表面的抗体捕捉样品中的病毒颗粒，再通过磁性分离金磁颗粒达到净化血液制品的目的。对两种指示病毒分别进行巴氏灭毒和偶联抗血清金磁颗粒处理，实时荧光定量PCR检测核酸变化确定病毒的去除效率，同时进行病毒的细胞感染力实验确定病毒的灭活效率，结果显示：在对DNA有包膜病毒的去除能力上，金磁颗粒法明显优于普通的巴氏灭活法；在对DNA有包膜病毒灭活能力上，巴氏法明显优于金磁颗粒法。在对DNA无包膜病毒的去除能力上，金磁颗粒法明显优于普通的巴氏灭活法；在DNA无包膜病毒灭活能力上，巴氏法对无包膜的DNA病毒作用有限，略优于金磁颗粒法。 实验初步显示应用荧光定量PCR技术联合病毒的细胞感染力实验将能够更好的同时检测病毒感染力的变化及病毒含量水平，更全面的评价方法之间的优劣差异，从而进一步降低血液制品的病毒污染风险。

目录

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缩略语表

第一部分 综述

第二部分实验

一 材料

二 实验方法

1.病毒灭活去除方法的选择和建立

2.PRV实时荧光定量PCR检测方法的建立

3.PPV实时荧光定量PCR检测方法的建立

第三部分 结果和分析

1.病毒灭活去除方法的选择和建立结果

1.1巴氏灭活法条件的优化结果

1.2金磁颗粒法条件的优化结果

2.PPV实时荧光定量PCR结果

2.1 PRV靶点扩增及克隆结果

2.2 PRV实时荧光定量PCR标准曲线方程

2.3 PRV实时荧光定量PCR重复性的检测结果

2.4对样品的检测结果

2.5病毒的细胞感染力对照试验结果

3.PPV实时荧光定量PCR检测方法的建立结果

3.1 PPV靶点扩增及克隆结果

3.2 PPV实时荧光定量PCR标准曲线方程

3.3 PPV实时荧光定量PCR重复性的检测结果

3.4对样品的检测结果

3.5病毒的细胞感染力对照试验结果

小结

参考文献

致谢