小蔓长春花内生真菌的诱变及其发酵条件的优化

摘要

本实验以从小蔓长春花茎中分离得到的内生真菌XM-J2为研究对象，经HPLC检测证实该菌株仍具有产长春胺的能力后，采用多种诱变方法对其进行了诱变，以获得高产突变菌株。
　　 经紫外线、He-Ne激光和NaNO2三种单因素诱变方法分别进行多次诱变后，确定出最佳诱变时间依次分别为：100s、20min和25min；用紫外线、激光、亚硝酸钠和LiCl两两组合的复合诱变法处理，挑选出各处理中的优势菌株进行同批培养后，结合紫外分光光度和HPLC检测法，筛选出最高产的菌株为经紫外线-激光复合诱变后的XM-UL-7-5突变株，其产长春胺能力达到1.194mg/L，比出发菌株的0.563mg/L提高了121.6％，菌丝干重达到6.41g/L，较出发菌株提高了62.3％。遗传稳定性实验表明，该优良性状能够稳定遗传。
　　 此外，本实验还通过优化培养条件的方法来提高菌株产量。以菌落的菌丝干重和长势为指标的固体培养和以菌株的生物量和产物含量进行比较实验的液体培养，筛选出的最佳固体和液体培养基均为马铃薯蔗糖培养基。单因素比较实验初步确定实验室发酵XM-UL-7-5的最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为酵母膏，最适培养温度为28℃。通过正交试验优化XM-UL-7-5的发酵条件，选择出的最佳培养基为马铃薯培养基含葡萄糖3％，蛋白胨2％，pH值为7，在此条件下菌丝干重和长春胺相对含量都达到了最大值，分别为9.4g/L和1.653mg/L。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分 绪论

一、小蔓长春花及长春胺概述

1、小蔓长春花概述

2、长春胺的理化性质

3、长春胺的药理作用

二、植物内生真菌的简单概述

1、植物内生真菌的定义

2、植物内生菌的多样性

3、部分内生菌产生的药用活性物质及其生物学作用

三、微生物诱变育种概述

1、物理诱变

2、化学诱变

3、复合诱变

4、生物诱变

四、本课题的研究意义

第二部分 实验部分

实验一、XM-J2菌株产长春胺能力的验证

1、实验材料

2、实验方法

3、结果分析

实验二、小蔓长春花内生真菌的诱变

1、实验材料

2、实验方法

3、结果与讨论

实验三、高产菌株培养条件的优化

1、实验材料

2、实验方法

3、实验结果和讨论

小结

参考文献

致谢