特女贞苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制研究

摘要

肝脏疾病一直是危害人们身体健康的常见疾病，当前来说，对肝脏疾病的防治工作仍然是一个比较艰巨的任务，所以，肝脏保护的研究及保肝药物的开发是目前药物研究的重点项目，创建动物急性肝损伤模型和筛选保肝药物具有重要的意义。特女贞苷(Specnuezhenide)属于裂环环烯醚萜苷类成分，是中药女贞子的特征性成分，为女贞子水溶性苷类中含量较高的成分之一，特女贞苷的含量为女贞子药材质量控制指标。目前研究发现，特女贞苷在体外表现出显著的清除自由基抗氧化作用，但尚未见动物水平氧化性肝损伤模型研究的报道，其抗氧化作用机制尚不清楚。本研究通过CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型，探讨特女贞苷对急性肝损伤小鼠的保肝作用及其潜在机制。主要研究结果有以下几个方面:
　　1.选取经典的CCl4急性肝损伤模型，初步研究特女贞苷对小鼠急性肝损伤的预保护作用，研究结果显示，特女贞苷能明显降低CCl4模型小鼠的肝脏系数，对肝损伤模型小鼠的ALT和AST水平的升高均有显著的降低作用，明显改善病理损伤状态，减轻肝组织损伤的程度，为进一步研究其抗氧化、抗炎保肝作用及内在机制奠定了基础。
　　2.研究了特女贞苷对急性肝损伤模型小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的影响，研究结果显示，特女贞苷能降低小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平，从而抑制肝脏的炎症反应，降低炎症反应对肝脏细胞造成的损伤。
　　3.探讨了特女贞苷对急性肝损伤模型小鼠肝脏组织匀浆中的MDA水平，及SOD、GSH-Px活性的影响，研究结果显示，特女贞苷能显著降低小鼠肝脏组织中MDA的水平，同时，能显著提高SOD和GSH-Px的活性，说明特女贞苷能够抑制MDA的产生，使肝脏内的抗氧化功能增强，从而减轻MDA引起的肝细胞损伤，发挥对小鼠急性肝损伤的预保护作用。
　　4.探讨特女贞苷对急性肝脏损伤模型小鼠肝细胞Nrf2及其下游的基因HO-1，GCLC和NQO1表达的影响，研究结果显示，特女贞苷可以提高模型小鼠Nrf2的核内表达，并启动其下游基因HO-1、GCLC和NQO1的转录和表达。表明特女贞苷能够明显减轻CCl4诱导的小鼠急性肝损伤，其发挥保肝作用的内在机制可能与其激活Nrf2抗氧化通路，调控Nrf2下游抗氧化酶HO-1，GCLC和NQO1的基因表达，从而减轻氧化应激损伤有关。

目录

声明

摘要

缩略语对照表

第一章 绪论

1．1 特女贞苷的研究概况

1．2 特女贞苷的药理作用

1．2．1 抗氧化作用

1．2．2 免疫调节作用

1．3 急性肝损伤

1．3．1 CCl4致急性肝损伤模型制作

1．3．2 急性肝损伤机理

1．3．3 急性肝损伤研究现状

1．4 几种技术简介

1．4．1 Western blot技术

1．4．2 免疫荧光技术

1．4．3 QRT-PCR技术

1．5 研究的目的意义及内容

1．5．1 本研究的目的和意义

1．5．2 研究的内容

第二章 特女贞苷对急性肝损伤小鼠的保护作用

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 药品与试剂

2．2．2 实验仪器

2．2．3 实验动物

2．2．4 CCl4花生油溶液的配制

2．2．5 动物分组与给药

2．2．6 肝指数、血清生化指标及肝脏病理检查

2．3 统计分析

2．4 结果与讨论

2．4．1 特女贞苷对肝损伤模型小鼠肝脏系数的影响

2．4．2 特女贞苷对肝损伤模型小鼠血清ALT和AST的影响

2．4．3 特女贞苷对肝损伤模型小鼠肝脏病理性改变的影响

2．5 本章小结

第三章 特女贞苷对急性肝损伤小鼠血清炎症因子的影响

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 药品与试剂

3．2．2 实验仪器

3．2．3 实验动物

3．2．4 动物分组与给药

3．2．5 ELISA法测定血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量

3．3 统计分析

3．4 结果与讨论

3．5 本章小结

第四章 特女贞苷对急性肝损伤小鼠肝氧化损伤的影响

4．1 引言

4．2 实验部分

4．2．1 药品与试剂

4．2．2 实验仪器

4．2．3 实验动物

4．2．4 动物分组与给药

4．2．5 肝组织匀浆的制备

4．4 结果与讨论

4．5 本章小结

第五章 特女贞苷对急性肝损伤小鼠肝氧化损伤保护作用机制

5．1 引言

5．2 实验部分

5．2．1 药品与试剂

5．2．2 实验仪器

5．2．3 实验动物

5．2．4 动物分组与给药

5．2．6 免疫荧光法测定肝细胞核Nrf2

5．2．7 QRT-PCR法检测HO-1，GCLC，和NQO1 mRNA表达

5．3 统计分析

5．4 结果与讨论

5．4．1 特女贞苷对急性肝损伤模型小鼠肝细胞Nrf2的影响

5．4．2 特女贞苷对急性肝损伤小鼠肝细胞HO-1、GCLC、NQO1的影响

5．5 本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间取得的科研成果

致谢