骨松灵合剂对去卵巢大鼠骨组织Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响

摘要

目的：探讨雌性大鼠去卵巢后骨组织中雌激素受体(ER)和I型胶原的变化，以及应用骨松灵合剂治疗后对其产生的影响，并从受体的角度出发探讨去卵巢大鼠骨质疏松(OP)的发病机制及骨松灵合剂的调整作用。
　　 方法：选用32周龄健康雌性SD大鼠4o只，随机分为4组：假手术组(sham组)10只，卵巢切除组(OVX组)10只，尼尔雌醇治疗组（E2组）10只，骨松灵合剂治疗组（中药组）lO只。OVX组、E2组、中药组大鼠行双侧卵巢切除术建模，8周后采用DEXA法测定脊椎骨及股骨骨密度(BMD)，通过分析比较确定建模后，sham组、OVX组常规喂养，E2组按照0.21mg/kg给予尼尔雌醇灌胃半个月一次；中药组按照12.6mg/kg剂量每FI灌胃骨松灵合剂一次，12周后，采用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR方法检测雌性大鼠去卵巢后骨组织中ER的变化，RT-PCR方法检测雌性大鼠去卵巢后骨组织中I型胶原的变化，以及骨松灵合剂、雌激素治疗后对其产生的影响。
　　 结果：与sham组相比，其余三组大鼠腰椎和股骨骨密度(BMD)明显降低(P<0.01)，提示OP模型的建立。免疫组化结果显示，椎体松质骨中ER a、ERB主要分布于骨小梁周围的成骨细胞、破骨细胞及骨髓基质细胞中，阳性颗粒为棕黄色，胞浆胞核均有表达，但胞核着色较深。与sham组比较，OVX组大鼠骨小梁周围及骨髓中阳性细胞灰度明显降低(P<0.01)，而中药组、E2组ER的阳性细胞灰度与OVX组相比显著增加(P<0.01)，两治疗组相比无显著差异。RT-PCR结果显示，与sham组比较，OVX组ER a、ERB、I型胶原mRNA表达明显降低(P<0.01)；而中药组、E2组与OVX组相比显著增加(P<0.01)；两治疗组比较无显著性差异。Western blot分析结果显示，与sham组比较，OVX组骨组织中ERa、ERB表达下降(P<0.01)；而中药组、E2组与OVX组相比显著增加（P<0.01）。
　　 结论：1、通过去卵巢可以顺利建成骨质疏松模型大鼠，揭示了雌激素降低可能是骨质疏松症的主要原因之一。2、ER a、ERIB在骨组织中呈较高水平的表达，主要分布于骨小梁周围的成骨细胞、破骨细胞及骨髓基质细胞中。雌性大鼠去卵巢后其转录和翻译同时受抑制，表明骨组织内ER的表达依赖于其配体的存在，提示手术或自然绝经后骨量的快速丢失不仅与雌激素的水平降低有关，而且与组织对雌激素的反应即受体水平的变化有关。ER a、ER B在雌激素的骨代谢调节中共同发挥作用。3、大鼠去卵巢后骨组织I型胶原的表达明显降低，提示雌激素与ER结合后促进I型胶原的表达，促进骨形成，绝经后雌激素的减少不仅会造成I型胶原分解的增加，而且还有合成的减少。4、骨松灵合剂可以逆转大鼠去卵巢后骨组织中Ell.a、ERB表达的变化，增加I型胶原mRNA的表达，促进骨形成，从而达到治疗作用。