人脑胶质瘤中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达和意义

摘要

目的:肿瘤的发生是多因素共同作用的结果,细胞周期调控失常和肿瘤血管生成是其发生发展中的两个重要方面。细胞周期蛋白(Cyclins)是调节细胞周期的关键因子,CyclinD1是细胞增殖期G1→S重要的调控因子,当细胞受到外界物质刺激后,CyclinD首先表达,其中最主要的是CyclinD1；血管内皮生长因子(VEGF)是血管形成过程中最重要的因子,它直接刺激内皮细胞(ECs)分裂增殖,是高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,最直接参与诱导肿瘤血管生成。本研究主要目的对胶质瘤进行细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和血管内皮生长因子(VEGF)检测,并分析两者在脑胶质瘤中表达的相关性,以探讨其在胶质瘤中发生、发展中的意义,为分析二者与胶质瘤病理分级的相关性及生物学意义提供资料。
　　 方法:52例胶质瘤手术标本取自山东省济宁市第一人民医院病理科2007年1月至2008年10月存档的手术标本,参照1999年WHO脑肿瘤分类及分级标准,并经两位病理科医师鉴定胶质瘤的级别,Ⅰ级9例,Ⅱ级16例,Ⅲ级12例,Ⅳ级15例,包括星形胶质细胞瘤31例,少突胶质细胞瘤9例,室管膜瘤2例,胶质母细胞瘤10例,正常脑组织为脑外伤行内减压术切除的脑组织。经10％福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片4μm厚,分别用于常规HE染色和CyclinD1、VEGF免疫组织化学染色。采用SP法,石蜡切片常规脱蜡至水,3％H2O2室温10min,滴加复合消化液5min,蒸馏水沈3次,根据两种抗体的要求,对组织进行相应的抗原修复,每张切片滴加50μl第一抗体,室温下孵育60分钟,生物素标记的二抗20℃,40 min,加入SP复合物20℃,40 min,DAB显色,镜下控制反应时间,苏木素轻度复染,脱水,透明,中性树胶封片,以PBS代替一抗作空白对照,正常脑组织作对照。CyclinD1蛋白定位于细胞核,以细胞核出现棕黄色颗粒为准；VEGF蛋白定位于细胞质,阳性结果以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。在不同位置选取10个高倍视野,每个视野100个细胞中阳性染色细胞个数,计算阳性百分率取平均值。分为4级:阳性细胞数<5％为(-),5％～25％为(+),25％～50％为(++),>50％为(+++。用统计学软件SPSS13.0处理,根据数据类型,分别行x2检验、秩和检验或Spearman等级相关性分析,检验水准α=0.05。
　　 结果:1.脑组织与胶质瘤组织中CyclinD1的表达:52例胶质瘤组织中有37例存在CyclinD1的阳性表达,10例脑组织中有1例CyclinD1阳性表达,CyclinD1呈典型胞核表达,为棕黄色颗粒状,核膜染色明显,有时因胞内染色质淡染和核膜深度着色而使整个阳性核看似空泡状。与正常脑组织相比,胶质瘤组织中存在CyclinD1的过度表达现象,两者有显著差异(P<0.01)(表1)。2.不同级别的胶质瘤组织中CyclinD1的表达:不同级别的胶质瘤中CyclinD1的表达不同,恶性程度越高,其表达越明显(表2)。Spearman等级相关性分析表明随着胶质瘤恶性程度的增高CyclinD1表达增强(P<0.05)3.脑组织与胶质瘤组织中VEGF的表达:52例胶质瘤组织中有41例存在VEGF的阳性表达,10例正常脑组织中VEGF无表达,VEGF阳性表达物质主要定位于细胞浆内,呈棕褐色颗粒状。胶质瘤组织中存在VEGF的过度表达现象,与正常脑组织相比,有显著差异(表3)4.不同级别的胶质瘤组织中VEGF的表达:不同级别的胶质瘤中VEGF的表达不同,恶性程度越高,其表达越明显。Spearman等级相关性分析表明随着胶质瘤恶性程度的增高VEGF表达增强(P<0.05)(表4)。5.VEGF与CyclinD1表达的相关性:VEGF蛋白阳性表达的41例胶质瘤中有25例同时表达CyclinD1蛋白,统计学显示有统计学差异(x2=7.58,P<0.05)(表5)。
　　 结论:
　　 1、CyclinD1和VEGF在脑胶质瘤中的表达量高于正常脑组织,且有统计学意义。
　　 2、CyclinD1和VEGF的表达随着胶质瘤恶性程度的增加而增强。
　　 3、二者在胶质瘤组织中的表达呈正相关。