去甲斑蝥素-羟丙基壳聚糖纳米粒的制备及其体外抗肿瘤性能研究

摘要

目的：以壳聚糖（CS）为初始原料，制备水溶性羟丙基壳聚糖（HPCS），进而制备去甲斑蝥素—羟丙基壳聚糖固体纳米粒（NCTD-HPCS-NPs），并研究该载药纳米粒对比原药去甲斑蝥素的体外释药性能，以及对肝癌细胞BEL-7402的体外增殖抑制作用。
　　方法：采用碱化交联法制备羟丙基壳聚糖，离子交联法制备去甲斑蝥素-羟丙基壳聚糖固体纳米粒，并应用正交设计试验优化各自制备条件；扫描电镜观察固体纳米粒的形态特性，透析法测定纳米粒的体外释药性；MTT法检测NCTD及NCTD-HPCS-NPs固体纳米粒分别对肝癌细胞BEL-7402体外增殖抑制作用，并测定其各自半数抑制浓度（IC50）。
　　结果：
　　1.羟丙基壳聚糖制备结果表明，HPCS最佳制备条件为：M壳聚糖：V环氧丙烷：V四甲基氢氧化铵=1:10:0.5，T=60℃，此条件下所得HPCS平均取代度为0.42，溶解度为7.5 g/L左右，具有较好的水溶性和良好的稳定性。
　　2.载药纳米颗粒制备结果表明：NCTD-HPCS-NPs最佳制备条件（浓度）为NCTD2.0 mg/mL、HPCS1.0mg/mL和TPP1.0mg/mL，所制得纳米颗粒平均粒径为95.15±3.81 nm，包封率为23.68±1.79％，载药量为54.53±2.61%，整体粒径较小，性质稳定。
　　3.载药纳米粒体外释药性实验结果表明，NCTD体外释药时间平均为3.5 h左右，释药量为95%以上，且在开始释药1.5 h左右存在明显突释现象；NCTD-HPCS-NPs平均释药时间则为6h左右，同样在开始1h左右存在小幅突释现象，之后表现出明显的缓释作用，最高释药量为80%左右。
　　4. MTT实验结果表明：加药24h后，低浓度（CNCTD=10μg/mL）时，NCTD体外抑癌活性稍高于NCTD-HPCS-NPs，中浓度（20μg/mL≤CNCTD≤80μg/mL）时，NPs抑癌活性则稍高于NCTD，高浓度（160μg/mL≤CNCTD≤640μg/mL）时，NPs抑癌活性更具优势，NPs给药24 h后可到66.46%左右；通过Origin8.0软件分析处理，获得NCTD对肝癌细胞BEL-7402的半数抑制浓度IC50为283.72±4.55μg/mL，NPs的IC50为194.26±3.69μg/mL，相比NCTD降低了30%左右。
　　结论：
　　1.制备出的羟丙基壳聚糖，具有较好的水溶性。
　　2.NCTD-HPCS-NPs载药固体纳米粒粒径较小、载药量高、性质稳定。
　　3.载药纳米粒相比原药在体外释放中具有较为明显的缓释性能，释放时间可延长至原药3倍左右，且累计释药量良好。
　　4.相对原药，同药物浓度的载药纳米粒对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制率更大，在单次给药相同的条件下，纳米粒IC50更低，一定程度上增强了药效，降低了毒性。

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第一章 文献综述

1.1 去甲斑蝥素研究进展

1.2 去甲斑蝥素固体纳米粒研究进展

1.3 羟丙基壳聚糖研究进展

1.4 课题来源

1.5 实验研究目的和意义

第二章 HPCS制备及工艺优化

2.1 材料与仪器

2.2 方法

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

第三章 NCTD-HPCS-NPs制备及工艺优化

3.1 材料与仪器

3.2 方法

3.3 结果与讨论

3.4 小结

第四章 NCTD-HPCS-NPs理化性质研究

4.1 材料与仪器

4.2 方法

4.3 结果与讨论

4.4 小结

第五章 NCTD-HPCS-NPs肝癌细胞增殖抑制研究

5.1 材料与仪器

5.2 方法

5.3 结果与讨论

5.4 小结

总结与展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表文章及参与课题