声明
缩略语
前言
一、金葡菌的发现及严重危害性
二、金葡菌Hlb的研究
三、中性粒细胞胞外诱捕网络(Neutrophil extracellular traps NETs)
四、T淋巴细胞
第一部分Hlb的表达及功能初步研究
1.1实验材料
1.1.1质粒和菌株
1.1.2试剂
1.1.3主要仪器
1.1.4试剂配制
1.2.1 Hlb蛋白的重组表达
1.2.2 Hlb生物学功能检测
1.2.3多克隆抗体的制备
1.2.4亲和纯化Hlb抗血清中Anti-Hlb IgG
1.2.5多克隆抗体对Hlb蛋白溶血活性的抑制
1.2.6 pET-28a-hlbH-149-N重组蛋白的表达
1.2.7 Western blotting方法验证Hlb、HlbH-149-N蛋白的分泌型表达
1.2.8 重组蛋白内毒素去除实验
1.2.9统计学分析
1.3实验结果
1.3.1 Hlb蛋白的重组表达
1.3.2 Hlb蛋白对绵羊红细胞溶血活性测定
1.3.3 Hlb蛋白对不同物种红细胞溶血活性测定
1.3.4 Hlb特异多克隆抗体的制备及其中和活性测定
1.3.5 HlbH-149-N蛋白的重组表达
1.3.6 Western 印迹方法验证重组蛋白的表达
1.3.7 HlbH-149-N蛋白对绵羊红细胞溶血活性测定
1.3.8 Hlb对绵羊红细胞细胞形态的影响
1.4 讨论
第二部分 Hlb与NETs的相互作用
2.1.1 试剂抗体
2.1.2 主要仪器
2.2.1 凝胶阻滞检测Hlb与DNA的结合
2.2.2诱导并检测NETs的形成
2.2.3 激光扫描共聚焦显微镜检测Hlb与NETs的结合
2.2.4 Hlb对NETs介导的杀伤作用
2.3.1凝胶阻滞检测Hlb与DNA的结合
2.3.2激光扫描共聚焦显微镜检测NET的形成
2.3.3激光扫描共聚焦显微镜检测Hlb与NETs的结合
2.3.4 Hlb对NETs介导的杀伤作用的影响
2.4 讨论
第三部分Hlb对T细胞的杀伤作用
3.1.1 试剂抗体
3.1.2 主要仪器
3.2.1 Hlb对人PBMC毒性作用检测
3.2.2 Hlb及其突变体HlbH-149-N对人外周血淋巴细胞杀伤作用的检测
3.2.3 Hlb对Jurkat细胞杀伤作用的检测
3.2.4 流式检测Hlb与Jurkat细胞的结合
3.2.5 Hlb与Jurkat细胞结合蛋白的钓取
3.3.1 Hlb对人PBMC毒性作用检测
3.3.2 Hlb及其突变体HlbH-149-N对人外周血淋巴细胞杀伤作用的检测
3.3.3 Hlb对Jurkat细胞具有杀伤作用
3.3.4 Hlb与Jurkat细胞结合检测
3.3.5 Hlb与Jurkat细胞膜结合蛋白的钓取
3.4讨论
结论
参考文献
致谢
个人简历