仔猪腹泻多病原卵黄抗体制备及稳定性研究

摘要

卵黄抗体是近年来的一个研究热点，用于多种疾病的预防和治疗，是一种有良好发展前途的生物制剂。本试验成功制备了针对仔猪腹泻的多病原卵黄抗体，并对卵黄抗体效价变化规律、分离提取方法、喷雾干燥条件及卵黄粉的稳定性进行了初步研究，试验结果如下所述。
　　 1.卵黄抗体效价变化规律的研究
　　 以引起仔猪腹泻的常见病原大肠杆菌(K88、K99、987P)和传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒为抗原，免疫蛋鸡，定期检测卵黄抗体滴度，得出卵黄抗体滴度变化规律:首次免疫抗原后7d可检测到抗体存在，但抗体滴度较低，随后抗体滴度缓慢升高，第2次免疫和第3次免疫后，抗体滴度有个小幅的下降，随后迅速升高，第3次免疫后12d，抗体滴度达到峰值，维持30d后抗体滴度逐渐下降。
　　 2.卵黄抗体分离提取方法比较
　　 从对卵黄的去脂效果、提取液的蛋白含量、提取的抗体纯度和对抗体活性的影响等方面，综合比较了酸化水法、聚乙二醇法、氯仿法和水-辛酸法4种分离提取卵黄抗体的方法，结果显示水-辛酸法效果最好，此种方法提取的抗体脂肪残留量较低、抗体产率高达6.8mg/mL、纯度93.6％，明显优于其它3种提取方法。
　　 3.卵黄粉的制作及稳定性研究
　　 研究了在卵黄中添加不同保护剂及其不同添加比例，喷雾干燥进出口温度对卵黄抗体的影响，结果显示:在卵黄中添加乙醇溶解邻苯二甲酸丙甲基纤维素和淀粉，进口温度145℃，出口温度70℃的条件制备的卵黄粉品质最好。
　　 为研究卵黄粉的稳定性，本试验采用温度梯度、pH梯度及保存条件作为影响卵黄粉中抗体的外部因素，对卵黄抗体稳定性进行了初步研究，结果显示:卵黄粉中抗体对温度稳定性良好，在70℃以下卵黄抗体性质稳定，90℃时抗体活性迅速下降;pH低于4.0，抗体开始失活，pH1.5时活性残余30％;卵黄粉在4℃存放6个月，抗体活性保持不变，25℃存放6个月，活性开始丢失。说明卵黄粉具有耐酸、耐碱，易于保存等优点。

目录

摘要

符号说明

前言

文献综述

1 卵黄抗体的研究概况

1．1 卵黄抗体的形成

1．2 卵黄抗体结构及生物学特性

1．3 卵黄抗体稳定性

1．4 卵黄抗体作用机理

1．5 卵黄抗体的提取方法

1．6 卵黄抗体应用

1．7 使用卵黄抗体存在的问题

1．8 卵黄抗体的发展前景

2 仔猪腹泻的研究

2．1 病毒性腹泻

2．2 大肠杆菌性腹泻

2．3 仔猪腹泻的防治现状

研究目的及意义

试验一 卵黄抗体滴度的消长规律

1 材料

2 方法

2．1 抗原的制备

2．2 检测用抗原的制备

2．3 试验动物及处理

2．4 卵黄抗体的提取纯化

2．5 卵黄抗体效价的检测

3 结果与分析

3．1 猪流行性腹泻病毒的培养

3．2 病毒毒价检测

3．3 检测用抗原最适浓度结果确定

3．4 卵黄抗体的变化规律

4 讨论

试验二 卵黄抗体分离提取方法的研究

1 材料

2 方法

2．1 卵黄的制备

2．2 卵黄抗体不同分离方法

2．3 卵黄抗体的纯化

2．4 不同方法提取卵黄抗体的效果比较

3 结果与分析

4 讨论

4．1 酸化水法

4．2 聚乙二醇法

4．3 氯仿法

4．4 水-辛酸法

试验三 卵黄粉的制作及温度、pH值和储存条件对抗体活性的影响

1 材料

2 方法

2．1 卵黄粉的制作工艺

2．2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响

2．3 pH值对卵黄粉中抗体活性的影响

2．4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响

3 结果与分析

3．1 卵黄粉制作工艺的研究

3．2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响

3．3 pH值对卵黄粉中抗体活性的影响

3．4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响

4 讨论

4．1 卵黄粉的制备工艺

4．2 温度对卵黄粉中抗体活性的影响

4．3 pH值对卵黄粉中抗体活性的影响

4．4 储存条件对卵黄粉中抗体活性的影响

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文

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