鸭瘟病毒强毒株AV1221株gH基因的克隆与截短型gH基因的原核表达

摘要

根据GenBank中已发表鸭瘟病毒弱毒株序列，设计合成3条引物。将鸭瘟强毒AV1221株100倍稀释，接种12日龄鸭胚绒毛尿囊腔，增殖病毒。以病毒DNA为模板，用PCR方法，扩增gH基因片段，并用巢式PCR进行目的DNA的筛选。将扩增得到的基因克隆到pMD18-T载体上，经蓝白斑筛选和PCR鉴定筛选出阳性克隆进行序列测定，用生物学软件将所测序列进行分析，然后将其与参考序列进行比较。结果显示:鸭瘟病毒AV1221株gH基因全长为2505bp，编码834个氨基酸，gH基因是一个完整的开放阅读框。与参考序列比较，核苷酸同源性为99.7％，氨基酸同源性为99.3％。上述结果表明，gH基因在不同毒株间高度保守。
　　 用生物学软件分析蛋白gH的抗原性，选取其中一段抗原性较好的区域，命名为gH1，重新设计一对引物，引物两端有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点，采用PCR方法克隆该片段。将所得的片段插入pMAL-2x载体，构建重组质粒，重组质粒经PCR和酶切鉴定为阳性后，转化入宿主菌TB1。IPTG诱导表达，经SDS-PAGE分析表明，在64.4KD处出现了与预期大小相符的目的条带。对表达蛋白做可溶性分析，证实该蛋白主要以包涵体形式存在。

目录

摘要

英文缩略词表

前言

第一章 文献综述

1 病原学研究进展

2 鸭瘟病毒诊断方法研究

3 鸭瘟病毒的防治

第二章 实验部分

试验一 鸭瘟病毒gH基因的克隆及序列分析

1 材料

2 方法

3．结果

4．讨论

试验二 鸭瘟病毒截短型gH基因的原核表达

1 材料

2．方法

3．结果与分析

4．讨论

结论

参考文献

附录

致谢

声明