山东省禽源大肠杆菌抗药性监测及药敏试验方法的改进研究

摘要

药敏试验是精确用药，保障疗效的必要方法。
　　 采用NCCLS（2007年，第十七版）抗生素最低抑菌浓度(MIC)微量稀释法分析了2007～2008年度山东省禽养殖场692株大肠杆菌分离株对15种抗生素的敏感性。结果表明，山东省禽源大肠杆菌对抗菌药已存在严重的抗药性，对氨苄西林、恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、磺胺二甲嘧啶和利福平的抗药性频率均超过96‰只对极少数的抗菌药物如阿米卡星、硫酸粘菌素敏感。分离菌株呈现多重抗药现象，抗药谱集中在10-14抗。广谱高抗菌株直接威胁动物和饲养员治疗安全，并可能通过食物链构成公共卫生隐患。
　　 基于琼脂稀释法，设计制作了96点阵抗生素药敏检测盒，以微量稀释法测定的MIC为对照，测定了98株大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星和中药三黄汤的最低杀菌浓度(MBC)。结果表明，两种方法测定的MBC、MIC都表现高度对称，其差值的平均值都在一倍稀释度内，在差值0.5μg/ml范围内都达到90％以上的符合。MBC与MIC高度相关，r=0.94-0.99。表明两种方法测定的MBC与MIC平行性好。以总体的抗生素敏感性频率比较，两种方法测定值也很相近，符合率为93.93％。本检测盒还可以准确测定中药三黄汤对大肠杆菌的MIC。96点阵抗生素药敏检测盒是适合于实验室进行大规模抗药性监测的新工具，具有简易、准确、快速、大通量、节约的优点。
　　 杀菌力是抗生素浓度、培养时间、细菌生理状态等变量的多元函数。传统方法只针对药物浓度，无法表征多因素的协同作用，本文测定了GEN和ENR对E.coliCVCC249的杀菌效力，用等效线图分别表征不同“生理阶段-药物浓度”下菌群对GEN和ENR敏感性、不同“作用时间-药物浓度”下不同接种量菌群对GEN的药物敏感性。等效线图分析二变量杀菌动力学，可以直观而真实地看到二变量对细菌残存率各自作用趋势及其共同作用效果，更透彻地分析抗生素抑菌杀菌行为。因此对于传统药敏方法的校正、以及新药评价是很有效的方法。

目录

摘要

符号缩略词表

文献综述

1 大肠杆菌抗药性研究进展

2 抗药性监测方法

3 选题的目的意义

试验一 2007~2008年度山东省禽养殖场大肠杆菌抗药性监测

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

试验二 大通量96点阵MBC药敏检测盒的设计及应用

1 技术背景

2 96点阵MBC药敏检测盒设计

3 96点阵MBC药敏检测盒的应用(与96孔板微量稀释法做对照试验)

4 小结

试验三 等效线法评价二变量药效动力学

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

论文总体结论和后续研究展望

参考文献

硕士期间发表文章

致谢

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