转录因子USF1在小鼠牙齿发育中的作用研究

摘要

尼古丁是损害牙胚并造成牙齿发育异常的重要原因之一,探讨它对牙胚毒害作用的分子机制是防治其危害的关键.多年来,人们仅从流行病学调查和体内实验证实了这一现象,最近该科的实验结果显示尼古丁干扰了牙乳头细胞的成熟和它们的重要生理功能;小鼠牙胚中有nAchR表达,尼古丁可通过nAchR损害牙齿发育并且上调其表达水平,但对于尼古丁这种作用的分子机制并不十分青楚.为了揭示转录因子USF1在牙齿发育过程中的调控作用并在此基础上探讨转录因子USF1在尼古丁损害牙齿发育中的作用机制而进行实验,其主要研究内容及结果如下:一.转录因子USF1在小鼠牙齿发育中表达的研究; 该部分研究首先应用RT-PCR和Western blot方法确定牙胚中有USF1表达,并在此基础上观察了牙齿发育过程中USF1mRNA和蛋白水平的分布模式.二、转录因子USF1对成牙本质细胞功能影响的研究;为了进一步正实转录因子USF1在牙齿发育中的功能,该部分实验通过体外培养成牙本质细胞MDPC-23,稳定转染USF1和A-USF1表达质粒,并检测细胞中USF1、骨桥素和TGF-β2表达的变化.三.转录因子USF1在尼古丁损害鼠牙齿发育中的作用研究;为了探讨转录因子USF1在尼古丁损害牙齿发育中的作用机制,该部分研究在进一步观察尼古丁对小鼠牙齿发育影响的基础上,检测尼古丁对成牙本质细胞中转录因子USF1转位、表达水平和细胞内Ca<'2+>浓度等的影响.综合以上实验结果,该研究发现转录因子USF1不仅在牙齿发育过程中有非常特异的时间、空间和细胞类型表达模式,可以参与调节成牙本质细胞合成OPN和TGF-β<,2>,而且可介导尼古丁对牙齿发育的毒害作用,因而认为转录因子USF1在牙齿发育中起着至关重要的作用.

目录

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缩略语表

前言

文献回顾

基因转录调控与转录因子HLH家族

转录因子USF1的研究现状

二.USF1的基因结构特征

三.USF1的蛋白结构特征

四.转录因子USF1的功能调节及特异性

五.转录因子USF1的功能研究进展

尼古丁与牙齿发育

参考文献

第一部分转录因子USF1在小鼠牙齿发育中表达的研究

实验1牙胚中转录因子USF1部分序列的cDNA克隆

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

4.参考文献

实验2 USF1 mRNA在小鼠牙齿发育过程中表达的原位杂交研究

实验3不同发育时期牙胚中USF1蛋白表达的检测

第二部分转录因子USF1对成牙本质细胞功能影响的研究

实验1成牙本质细胞中转录因子USF1表达的研究

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

4.参考文献

实验2转录因子USF1与A-USF对成牙本质细胞表达OPN和TGF-β2影响的研究

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

4.参考文献

第三部分转录因子USF1在尼古丁损害鼠牙齿发育中的作用研究

实验1尼古丁对小鼠牙齿发育影响的形态学观察

实验2尼古丁对成牙本质细胞中USF1核转位影响的研究

实验3尼古丁对成牙本质细胞内Ca2+浓度影响的研究

实验4尼古丁对转录因子USF1表达水平影响的研究

全文总结

致谢

个人简历

攻读博士期间发表论文情况

攻读博士期间参加学术会议论文

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