构建含黑色素细胞以及血管结构的组织工程皮肤的研究

摘要

组织工程皮肤产品的研制成功为治疗皮肤的急性和慢性损伤提供了一个极有前景的治疗方法.总的来说,组织工程皮肤可以针对各种病理情况(烧伤、疤痕、深度溃疡和先天畸形等)构建各种不同的生物产品.同时还可以在组织工程皮肤产品中整合各种针对性的治疗因子,从而大大降低全层皮肤缺损造成的发病率和死亡率.组织工程皮肤提供了足够的可供移植的皮肤来源,但是只能恢复部分解剖结构和部分生理功能.因此,组织工程皮肤的全部潜力还远远未被开发.在该实验中,我们准备构建两种组织工程皮肤,一个含有黑色素细胞,另一个含有血管样结构,具体实验如下:1.探讨如何以简便快捷的方法获得大量生长状态良好的高纯度黑色素细胞:以包皮组织作为细胞来源,用消化法获得表皮细胞悬液,用该实验室设计的方法对黑色素细胞进行纯化,然后用两种不同培养基MC1、MC2培养细胞,Dopa染色,免疫组化检测(S-100)和透射电镜鉴定细胞来源,通过MTT和流式细胞仪分析观察细胞的生长状态.2.运用组织工程方法构建含有黑色素细胞的组织工程皮肤:以包皮组织作为细胞来源,用消化法获得角朊细胞、成纤维细胞和黑色素细胞,用该实验室设计的组织工程皮肤培养系统构建组织工程皮肤.用Dopa染色、透射电镜和免疫组化检测(S-100)构建的皮肤中黑色素细胞的分布和状态.用所构建的组织工程皮肤修复裸鼠的全层皮肤缺损.3.探讨如何以简便快捷的方法获得大量生长状态良好的人血管内皮细胞以作为构建含血管结构组织工程皮肤的种子细胞:以新生儿脐带静脉作为细胞来源,用消化法获得血管内皮细胞,用该实验室设计的方法对细胞进行纯化培养,倒置显微镜观察细胞形态,结合免疫组化检测(第Ⅷ因子)和透射电镜(Weibel-Palade小体)鉴定细胞来源.4.运用组织工程方法构建含有血管结构的组织工程皮肤:以新生儿脐带静脉和包皮作为细胞来源,用消化法获得血管内皮细胞、皮肤的角朊细胞和成纤维细胞,用该实验室设计的组织工程皮肤培养系统构建组织工程皮肤,其中真皮层成纤维细胞和血管内皮细胞的比例为1/1,在真皮表面种植角朊细胞以形成表皮.HE染色和免疫组化检测(第Ⅷ因子)观察真皮层中血管结构的形成情况.用所构建的组织工程皮肤修复裸鼠的全层皮肤缺损. 该实验成功构建了含黑色素细胞和血管样结构的组织工程皮肤.含色素的组织工程皮肤的成功构建,为今后构建含不同比例的色素细胞,形成不同颜色的组织工程皮肤提供了技术支持,可以满足不同皮肤缺损修复的要求.含血管结构组织工程皮肤的成功构建,使得组织工程皮肤对于皮肤缺损创面的要求进一步降低,还可以构建厚度更大的皮肤以利于临床医生的操作,同时为构建更大体积的组织工程产品提供了积极的技术参考.

目录

声明

缩略语表

前 言

文献综述一：组织工程皮肤产品的设计及使用原则

一组织工程皮肤的要求

二人皮肤组织工程的原则

三组织工程皮肤的临床应用与评估

四结论及展望

参考文献

文献综述二：组织工程产品的血管化

一新血管的形成

二促血管成生因子

三组织工程产品的血管化

四总结及展望

参考文献

实验研究一高纯度黑色素细胞培养方法的改进

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

实验研究二构建含黑色素细胞组织工程皮肤的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

实验研究三作为组织工程皮肤种子细胞的人血管内皮细胞的培养方法

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

实验研究四构建含血管结构的组织工程皮肤的研究

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

全文总结

致 谢

个人简历

博士研究生期间发表的相关论文：

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