不同细胞滋养层对人角朊细胞体外培养的影响

摘要

目前,在烧伤创面治疗中取自体皮片移植仍是最主要的方法,对于大面积烧伤患者来说自体皮源远远不能满足临床需求,组织工程技术的发展使体外培养人表皮细胞的技术不断得以完善,自体皮肤(主要是角朊细胞)体外快速扩增为烧伤治疗提供了广阔的前景.经典的角朊细胞培养方法以放射线处理的3T3细胞作为滋养层,以FAD作为培养基,角朊细胞体外培养周期一般需要2周,不能及时满足临床需要.该实验研究的目的即对传统的人角朊细胞体外培养方法进行研究及改进,利用丝裂霉素处理的3T3细胞和人成纤维细胞分别作为滋养层,比较人角朊细胞在两种细胞滋养层上体外培养融合的周期,以期找到能使人皮肤角朊细胞体外培养更快融合的培养体系.探索和寻找人角朊细胞体外培养适宜的滋养层细胞,完善人角朊细胞体外培养快速扩增的技术和方法.该实验分别在3T3细胞、原代培养的人成纤维细胞上接种原代人角朊细胞,并设无滋养层细胞的空白对照.通过角朊细胞在不同滋养层上贴壁生长及融合时间的观察,确定适合角朊细胞生长的最佳细胞滋养层.在对不同滋养层细胞的处理上分别采用了钴60放射线照射的传统方法和丝裂霉素C处理,通过对处理前后成纤维细胞形态的改变以及存活时间的观察,比较两种处理方法对滋养层细胞生物活性的影响.我们还在丝裂霉素对同一个体相同代数人成纤维细胞适宜的作用浓度方面进行了研究,设计了3个实验浓度的丝裂霉素C(5 μg/ml、1 0 μ g/ml、1 5μg/ml),分别处理人成纤维细胞及3T3细胞,以处理后细胞失去增殖能力为标准,确定适宜的作用浓度.并对处理后成纤维细胞的存活时间进行了观察.结论:经丝裂霉素处理的原代培养人成纤维细胞是体外扩增人角朊细胞的理想滋养层细胞.在相同接种密度条件下,角朊细胞生长融合的时间较以3T3细胞作滋养层明显缩短.

目录

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缩略语表

前言

文献回顾

正 文

实验一丝裂霉素最适作用浓度的测定

实验二丝裂霉素C与放射线两种处理方法对成纤维细胞的影响

实验三人皮肤角朊细胞在不同滋养层上生长融合的观察

全文总结

附 图

个人简历和研究成果

致 谢