人胎儿皮脂腺细胞和汗腺细胞的体外分离培养和人胎儿表皮干细胞向毛囊、皮脂腺和汗腺诱导分化的初步研究

摘要

烧伤后引起的局部或全身损害均与皮肤屏障的丧失有关，尽早封闭创面并最大可能地恢复功能与外观是烧伤治疗的主要目标。如何最大程度的减轻免疫排斥是组织工程皮肤研制中急需解决的另一个难题。 本课题的研究目的是通过器官培养的体外原代培养方法培养人胎儿皮脂腺和汗腺细胞，观察总结人胎儿皮脂腺细胞和汗腺细胞体外培养的生物学特点；利用脐带血清、毛乳头细胞、5α-双氢睾酮/3-甲基-1-异丁基黄嘌呤及表皮细胞生长因子等模拟诱导人胎儿表皮干细胞分化为毛囊、皮脂腺和汗腺等皮肤附属器分化的微环境；利用胎儿皮肤细胞为种子细胞构建组织工程皮肤，以最大限度地降低免疫原性。 本研究的创新点在于：利用Dispase酶消化结合显微器械解剖法分离得到人胎儿皮脂腺；利用Ⅱ型胶原酶消化结合显微器械解剖法分离得到人胎儿汗腺，并观察总结人胎儿汗腺细胞体外培养的形态变化和生物学特点；分别用5α-双氢睾酮和3-甲基-1-异丁基黄嘌呤+胰岛素+地塞米松作为诱导刺激因子，并在培养基中添加脐带血清和增加EGF含量；以诱导后的表皮干细胞膜片为表皮层，以接种毛乳头细胞和成纤维细胞的PGA材料+纤维蛋白凝胶为真皮层构建的组织工程皮肤来修复裸鼠全层皮肤缺损创面，结果表明表皮干细胞在适宜的微环境下可以通过诱导分化为毛囊、皮脂腺和汗腺等皮肤附件。

目录

独创性声明及保护知识产权声明

缩略语表

前言

文献回顾

人皮脂腺研究进展

人汗腺研究进展

人表皮干细胞定向分化调控进展

1人胎儿皮肤皮脂腺细胞的初步分离培养

1.1人胎儿表皮细胞悬液的制备和角质形成细胞的培养及收集其培养液

1.2人胎儿皮肤皮脂腺的体外分离、原代培养和鉴定

2人胎儿皮肤汗腺细胞的初步分离、培养和鉴定

3人胎儿表皮干细胞的体外分离培养及其向毛囊、皮脂腺和汗腺的初步诱导分化

3.1人胎儿成纤维细胞的培养及培养液的收集

3.2人胎儿表皮干细胞的分离、培养及鉴定

3.3人胎儿毛乳头细胞的体外分离、培养和鉴定

3.4人表皮干细胞诱导分化为毛囊、皮脂腺和汗腺的初步实验

3.4.1实验材料和方法

3.4.2结果

3.4.3讨论

小 结

参考文献

个人简历及在读期间发表的与学位论文有关的学术论文

致 谢