抗汉滩病毒NP和GP双特异性抗体的构建及其在昆虫细胞中的表达

摘要

本研究首先将mAb 1A8的VH基因和3G1的VL基因连接构建异源抗体ScFv基因，并将mAb 3G1的VH基因和1A8的VL基因连接构建另一个异源抗体ScFv基因，1A8的VL基因还与人Cκ基因连接。将两个异源抗体的ScFv基因均克隆入原核表达载体pComb3中。转化Ecoli JM109，IPTG诱导表达，收集细菌，经超声裂解，取裂解上清用间接免疫荧光试验和ELISA分别检测，结果表明表达产物可与HTNV的NP抗原特异性结合。另外构建了含有嵌合基因的杆状病毒转移载体ScFv-pFBD-ScFv'，转化DH10Bac致敏菌，利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上，快速筛选出含有抗HTNV双特异性抗体嵌合基因的重组杆状病毒，采用脂质体法将重组杆状病毒表达载体转染Sf9昆虫细胞。利用间接免疫荧光试验、ELISA、微量细胞中和试验分别检测昆虫细胞中的表达产物，结果表明构建的含抗HTNV双特异性抗体嵌合基因之重组杆状病毒，能在昆虫细胞中表达出特异性抗体，该抗体能被兔抗人Cκ抗体所识别并可与HTNVNP和糖蛋白(GP)特异性结合。

目录

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资助

缩略语表

前言

文献回顾

实验一 抗汉滩病毒双特异性抗体原核表达载体的构建

实验材料

实验方法

实验结果

实验二 抗汉滩病毒双特异性抗体在昆虫细胞中的表达及免疫学特性的初步鉴定

实验材料

实验方法

结果

讨论

小结

参考文献

个人简历及研究成果

致谢