磁分离酶联免疫测定系统在细胞因子检测中的应用

摘要

在本研究中，用异硫氰酸荧光素和碱性磷酸酶分别标记识别不同表位的两种抗人IL-4单克隆抗体，用抗FITC mAb包被免疫磁珠，建立了检测人IL-4的磁分离酶联免疫测定法，通过选择两株标记抗体的最佳工作浓度等优化了检测系统。本系统的检测水平达10 ng/L，交叉反应试验证明该系统的特异性高，稀释回收试验复得率及批内批间试验的变异系数分别为99.4﹪-103.9﹪，3.0﹪-4.6﹪和3.2﹪-4.0﹪，说明检测系统具有较高的稳定性。将此系统应用于临床，检测了部分正常人和疾病患者血清中IL-4的水平，结果发现在肾病综合征患者血清中IL-4的水平明显高于正常人，而且与疾病的病程有关，缓解期患者血清IL-4水平比极期下降了9.7倍。 又利用相似的技术路线建立了检测人TNF的磁分离酶联免疫测定法。 此外，较系统地纯化并鉴定了18株抗人IL-1β单克隆抗体的效价和亚类，确定5株具有生物学中和活性，在表位鉴定的基础上建立了检测人IL-1β双抗体夹心ELISA法，检测临床标本中，发现正常人血清中检测不到IL-1β，而63.6﹪的RA患者血清可检测IL-1β的含量。

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前言

文献回顾

一、细胞因子概述

二、 Th1、Th2样细胞因子

三、细胞因子的检测

四、磁分离酶联免疫测定系统

1人白细胞介素4的磁分离酶联免疫法检测

2人肿瘤坏死因子的磁分离酶联免疫法检测

3抗人白细胞介素1-β克隆抗体制备及鉴定

小结

参考文献

附录

致谢