无创定量超声积分与肝纤维化程度关系的实验及临床研究

摘要

肝穿刺活体病理组织学检查是诊断慢性肝病肝纤维化、肝硬化的金标准，但目前常规实施肝穿刺活体组织病理学检查尚有相当难度，超声诊断技术作为一种简便快捷的无创性检查手段，如能在慢性肝病肝纤维化阶段的诊断中发挥作用，对于临床治疗及逆转肝纤维化的疗效观察将具有积极的帮助。 目的: (1)本研究通过制作实验性肝纤维化动物模型并搜集临床肝纤维化患者，应用多指标超声观察，进行半定量分析并计算每个实验鼠及肝纤维化患者每次超声积分，探讨肝纤维化的超声定量诊断作用。 (2)计算不同阶段纤维化的肝循环指数(HCI)及A/P，评估肝储备功能。 (3)分别进行肝纤维化血清学指标检查及外周血清常规生化肝功能检查。 (4)在超声引导下，对肝纤维化模型鼠及患者进行肝组织组织病理学活检。肝纤维化的病理诊断标准采用2000年西安会议标准。 (5)每份动物实验标本采用免疫组化方法检测细胞增殖相关因子细胞增殖核抗原PCNA及癌基因C-erbB-2的表达。 材料与方法: (1)肝纤维化模型制作：健康清洁级雄性SD大鼠(购自第四军医大学实验动物中心)35只，体质量150--220g，平均180g，随机分五组，一组为对照组(S0)，其余四组采用复合因子致肝纤维化模型方法，建立鼠肝纤维化模型。 (2)对肝纤维化动物模型及肝纤维化患者进行分别进行二维超声及彩色多普勒血流动力学检查，结果以磁光盘保存，脱机分析，对不同时期肝纤维化模型及肝纤维化患者进行超声积分及半定量分析。 (3)通过彩色多普勒血流动力学检测，计算肝循环指数(HCI)及A/P。 (4)检测对照组和各实验组外周血清纤维化指标水平和外周血清常规生化肝功能(总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血清白蛋白、血清球蛋白)。 (5)对实验鼠肝组织进行免疫组织化学染色，观察肝组织内细胞增殖相关因子细胞增殖核抗原PCNA及癌基因C-erbB-2的表达。 结果: (1)肝实质平均灰阶值S0期与S1～4期间有显著差异(P＜0.01)，S1～4各组间有显著差异(P＜0.01)。随着纤维化程度加重，离散度S0期与S1-4期有显著性差异，实验组间比较S1～4期间有显著性差异(P＜0.01)。超声检查结果与肝纤维化分期的相关性分析表明，超声总积分与病理分期相关系数为0.860(P＜0.01)；如采用超声总积分与血清肝纤维化指标联合应用，可使早期肝硬化诊断灵敏性提高至96.5％，特异度提高至95.8％。 (2)随着纤维化程度的加重HCI逐渐降低，A/P逐渐升高。 (3)经比较发现，超声、CTP、MELD积分与肝纤维化病理分期相关系数为0.860，0.815，0.824，超声、CTP、MELD积分诊断肝纤维化敏感度分别为94.5％，94.2％，93.9％，其特异度分别为93.4％，92.9％，93.8％。 (4)随着纤维化程度加重，肝纤维化实验鼠及患者的血清肝纤维化指标和生化指标总胆红素(TB)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)变化渐趋明显。 (5)免疫组化染色结果表明，对照组肝细胞核细胞增殖核抗原PCNA呈阴性表达，实验组各期肝细胞核不同程度PCNA阳性表达；对照组肝细胞膜癌基因C-erbB-2阴性表达，实验组各期肝细胞膜不同程度细胞C-erbB-2阳性表达，两者表达率在S1-4期均有显著性差异。 结论: (1)计算机辅助超声图像半定量分析，可对不同阶段肝纤维化进行量化。超声总积分与病理分期相关性较好，相关系数为0.860;采用超声总积分与血清肝纤维化指标联合应用，可使肝硬化诊断灵敏度提高至96.5％，特异度提高至95.8％。超声、CTP、MELD积分三种方法结合使用，诊断肝纤维化敏感度可提高至96.7％，特异度可提高至95.5％。 (2)HCI及A/P可反映肝纤维化时肝脏储备功能。 (3)随着纤维化程度加重，肝纤维化实验鼠和患者的血清肝纤维化指标及血清生化指标改变渐趋明显。 (4)免疫组化染色显示，肝纤维化患者肝细胞核PCNA及肝细胞膜C-erbB-2不同程度阳性表达，表明在肝纤维化基础上有继发肝细胞性肝癌的危险性。

目录

独创性声明及保护知识产权声明

缩略语表

前 言

文献回顾

第一部分 无创定量超声积分与肝纤维化程度关系的实验研究

第二部分 无创定量超声积分与肝纤维化程度关系的临床研究

全文小结

参考文献

附 图

个人简历和发表论文

致 谢