P物质纳米缓释系统的建立及其生物学作用的初步实验研究

摘要

正畸牙周组织的改建离不开神经系统的调节作用，神经肽与正畸牙周组织改建的关系十分密切。已经证实主要是神经肽SP、CGRP等参与了牙周组织的改建，尤其是牙槽骨的改建。作为多肽类物质，神经肽类物质很容易被酶消化降解，在机体内半衰期仅几分钟，这就很难使其长时间发挥生理效用。为了能较长时间的研究观察其作用，建立一种缓释载药系统很有必要。本研究旨在建立一种P物质纳米缓释系统，使能够持续缓慢释放P物质，延长其作用时间，并将其用于细胞学试验和动物实验中，较长时间的观察研究神经肽P物质对牙周膜细胞以及在牙槽骨改建中的作用，以期有助于进一步阐明神经肽在正畸牙周改建中的神经调控机理。主要研究内容及结果如下： 1P物质PLGA纳米缓释微粒(SP-PLGANP)的制备及其性质测定以PLGA为载体，应用复乳-溶剂挥发法制备P物质缓释纳米微粒，扫描电镜考察其形态和大小，并运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其载药率、包封率及体外释药特性。结果显示：在电镜下，该纳米球表面光滑圆整，球体均匀度好，粒径分布较均匀，平均粒径114.56±21.42nm。SP-PLGA纳米微粒的载药率和包封率分别为32.08×10-3(g/g)、66.28％，累计释放率相对时间的释药曲线图显示：P物质纳米粒体外能够持续释药，具有缓释效果。结果说明：建立了较好的P物质PLGA纳米缓释微粒粉制备工艺，载药纳米微粒体外具有明显缓释特性。 2SP-PLGANP对体外培养人牙周膜细胞增殖作用的影响 将SP-PLGANP加入人牙周膜细胞的培养液中，运用四甲基偶氮挫盐微量反应比色法(MTT)测定细胞增殖情况。MTT显示：培养1天时，各组吸光度值(OD)差异均无显著性；3天时，P物质组＞缓释纳米粒组＞空白组；5天时缓释纳米粒组＞P物质组＞空白组；培养7天时结果与培养5天结果相同，继续表现为缓释纳米粒组OD值最高。结果提示：我们制备的纳米粒中P物质生物活性保存良好，能持续释放P物质，能够较长时间促进成纤维细胞增殖。 3SP-PLGANP对大鼠磨牙正畸加力后牙周压力侧破骨细胞数目的影响 本试验在给大鼠正畸加力后立即将SP-PLGANP注射入大鼠第一磨牙根尖水平牙龈下，分别在加力后1，3，7，14天后取材制作HE切片观察组织变化和牙周压力侧破骨细胞数目，并和单纯用P物质以及空白对照组比较，以进一步揭示P物质对正畸牙周改建的作用。组织切片显示：加力后一天，三组间牙周都未发现有破骨细胞；加后3天，破骨细胞数量表现为P物质组＞缓释纳米粒组＞对照组；加力后7天，表现为缓释纳米粒组＞P物质组次＞对照组；加力14天后，三组破骨细胞数量都有减少，但缓释纳米粒组数量最多，多与其它两组。结果提示：P物质能促进正畸中牙周破骨细胞形成，而SP-PLGANP能在较长时间维持这种作用。

目录

主要英文缩略词表

前言

文献回顾一 P物质的概况及生理功能

文献回顾二 药物纳米缓释系统

实验一P物质PLGA缓释纳米粒的制备及其性质鉴定

实验二SP-PLGA NP对体外培养人牙周膜细胞增殖作用的影响

实验三SP-PLGA NP对大鼠磨牙正畸加力后牙周压力侧破骨细胞数目的影响

全文总结

参考文献

研究生简历及学习期间完成论文

致 谢

附 录

临床病例展示