抗HIV-1 gp41合成多肽gp41-5单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

摘要

本研究首先以人类免疫缺陷病毒HIV-1囊膜糖蛋白gp41多肽免疫小鼠，采用杂交瘤技术制备并获得了针对gp41-5多肽的4株mAb，分别命名为E10、2H6、2C1、E12。采用ELISA间接法进一步鉴定了mAb的特异性：分别包被N36、C34、N36(L6)C34、N51(L6)C46多肽，检测抗gp41-5多肽的mAb腹水；包被gp41-5多肽，分别检测抗N51(L6)C46多肽的mAb1A2、1A4、189、3A1，抗N36(L6)C34多肽的mAbNC-1，以及本次获得的抗gp41-5多肽的4株mAbE10、2H6、2C1、E12。结果显示，mAbE10、2H6、2C1、E12均与gp41-5多肽反应，与N36、C34、N36(L6)C34和N51(L6)C46多肽均不反应；抗N51(L6)C46mAb1A2、1A4、1B9、3A1亦不与gp41-5多肽反应，因此表明我们制备的mAb具有很高的特异性，并提示它们是抗gp41融合态构象的mAb。将这4株mAb与mAbNC-1的抗体相对亲和力作比较，其高低依次为NC-1＞E10＞E12＞2C1＞2H6。位点相加和竞争ELISA法分析其抗原表位，发现这4株mAb中E10、E12、2C1均识别不同的抗原表位，而2H6识别的抗原表位可能与E12、2C1及NC-1识别的抗原表位均有交叉。另外，E12与NC-1识别不同的抗原表位，其余3株mAb识别的抗原表位与NC-1也有差异。 在此基础上，选取mAbE12为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的2H6作为酶标抗体建立了双抗体夹心ELISA法，其检测gp41-5多肽的灵敏度达100pg/mL，并具有良好的特异性与稳定性。采用该方法检测40份HIV-1抗体阳性血清中的gp41抗原，结果共检出27份，检出率为67.5％。本研究结果为HIV-1及其感染的研究和HIV-1感染的早期检测提供了有用的工具。

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