siRNA抑制HepG2细胞mcl-1表达及mcl-1体外抗HepG2细胞凋亡作用的研究

摘要

目的：本研究旨在研究mcl-1特异性siRNA转染人类肝癌细胞HepG2，对HepG2细胞mcl-1 mRNA水平及Mcl-1蛋白表达水平的影响，及其对体外培养HepG2细胞增殖、凋亡的影响。初步探讨mcl-1在肝癌凋亡中的作用。 方法： 1 通过计数法测定HepG2 细胞的生长曲线，获得该细胞系基本生长特性。 2 将mcl-1 特异性siRNA 经脂质体介导转染人肝癌细胞HepG2；半定量RT-PCR 观察转染前后mcl-1 mRNA 水平变化，比较对应不同位点的两对siRNA 片段对mcl-1 的干扰效果，分析RNA 干扰的特异性、时效性；Westernblot 检测转染前后Mcl-1 蛋白表达情况。 3 绘制转染mcl-1 特异性siRNA 前后HepG2 细胞生长曲线，检测转染mcl-1 特异性siRNA 对HepG2 细胞增殖的影响；Annexin V/PI 双标记染色检测转染mcl-1 特异性siRNA 对HepG2 细胞凋亡的影响。 结果： 1 通过细胞计数法绘出HepG2 细胞的生长曲线。 2 mcl-1 特异性siRNA片段能有效降低mcl-1 mRNA水平，最大干扰效率达(67.25±4.47)％，高于作为对照的非相关片段(P＜0.05)；针对不同位点的两对siRNA片段(siRNA-F1、siRNA-F2)对mcl-1 均可产生干扰作用，彼此间差别不大；干扰作用于转染后24h即可出现，48h达高峰，72h稍有降低；Westernblot证明转染siRNA-F1后Mcl-1 蛋白表达显著下调(P＜0.05)。 3 转染mcl-1 特异性siRNA-F1的HepG2 细胞增殖受到抑制；Annexin V/PI双标记染色检测发现与对照组相比，转染siRNA-F1 48h后，HepG2 细胞中凋亡细胞所占比例显著增高(P＜0.01)。 结论 1 mcl-1 特异性siRNA 可有效下调肝癌细胞HepG2 中mcl-1 mRNA 水平Mcl-1 蛋白表达。 2 mcl-1 特异性siRNA 下调肝癌细胞HepG2 中Mcl-1 蛋白表达后，HepG2 细胞增殖受到抑制，细胞凋亡增加，表明Mcl-1 在体外培养的肝癌细胞HepG2 中发挥抗凋亡作用。