人源肝癌单链抗体基因真核表达质粒的构建、表达

摘要

近年来，逐渐发展的抗体库技术为制备高亲和性的人源抗体提供了有力工具。单链抗体（ScFv）可以在预先并不知道细胞表面受体特征的情况下与肿瘤细胞特异性结合而获得，ScFv蛋白具有分子小、穿透力强等优点。我实验室利用噬菌体抗体库技术，构建了全人源肝癌ScFv噬菌体库，并筛选到了一株肝癌特异性ScFv基因，为了实现ScFv基因的功能性表达，为了进一步鉴定ScFv蛋白的功能,我们利用筛选到的基因进行蛋白的真核表达。
　　目的：构建人源肝癌单链抗体基因真核表达质粒pSectag2B/ScFv并在中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）中获得表达，为人源肝癌ScFv蛋白的进一步功能研究和临床应用提供依据。
　　方法：我实验室筛选得到一株肝癌特异性ScFv基因，用PCR及核酸内切酶技术将其克隆入真核表达质粒pSectag2B，构建重组质粒pSectag2B/ScFv，测序鉴定后，电转染CHO细胞，利用SDS－PAGE和Western blot技术检测目的蛋白的表达情况。
　　结果：将750bp人源肝癌ScFv基因插入真核表达质粒pSectag2B，经DNA测序鉴定正确，成功构建了重组质粒pSectag2B/ScFv。将pSectag2B/ScFv转染CHO细胞后获得目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明目的蛋白Mr约为34000。
　　结论：成功构建含人源肝癌ScFv基因重组质粒pSectag2B/ScFv，并在CHO细胞中获得表达，为人源肝癌ScFv的进一步的应用研究提供依据。

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缩略语表

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英文摘要

前 言

文献回顾

一、小分子抗体的研究

二、基因重组质粒的表达体系及其研究进展

正 文

实验材料

一、细胞系、菌种和质粒

二、主要试剂

三、主要仪器

四、主要试剂配制

第一部分 人源肝癌单链抗体基因真核表达载体的构建

一、实验方法

二、实验结果

第二部分 重组质粒的真核细胞表达、检测

一、实验方法

二、实验结果

讨论

小 结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢