烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在大鼠实验性牙周炎牙周组织表达的研究

摘要

大量的流行病学调查和研究表明，吸烟是牙周病尤其是重度牙周炎的高危因素。吸烟者较不吸烟者牙周炎的患病率高、病情重。吸烟与附着丧失、牙周袋形成、骨丧失等密切相关。然而，吸烟对牙周组织破坏作用的机制仍不明了。以往的研究认为，乙酰胆碱受体主要存在于神经或神经相关组织中。然而，最近有研究发现在机体非神经部位也存在乙酰胆碱受体，其中包括人的口腔上皮组织。但是，乙酰胆碱受体是否在牙周组织中有表达以及尼古丁对该受体表达的影响尚不清楚。因此，本研究采用动物实验、Micro-CT建模、免疫组化和原位杂交等方法观察牙周组织是否存在烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型（α7nicotineacetylcholinereceptor，α7nAChR）及尼古丁对该受体表达的影响，旨在探讨α7nAChR在吸烟与牙周病发生发展过程中的可能作用和尼古丁对牙周炎发生发展的影响。
　　1、建立大鼠实验性牙周炎动物模型
　　36只6周龄SD大鼠，经戊巴比妥麻醉、固定，丝线结扎上颌右侧第二磨牙颈部，左侧不予结扎作为自身对照。大鼠经结扎后随机分成对照组（A）及尼古丁注射低剂量（B）和高剂量（C）实验组，分别给予生理盐水和尼古丁0.83mg/kg/d、1.67mg/kg/d腹腔注射。于实验第14天和28天分别处死大鼠，取双侧上颌磨牙区牙体牙周组织，Micro-CT扫描，常规制作石蜡切片。临床检查发现各组结扎侧在第14天可观察到结扎处牙龈组织不同程度的炎症现象，28天时症状进一步加重。而各组对照侧均未观察到明显牙周炎症表现。组织学和Micro-CT方法证实牙颈部丝线结扎方法可成功的建立大鼠实验性牙周炎模型，腹腔注射尼古丁可加重大鼠牙槽骨丧失，呈剂量依赖性。
　　2、建立牙周炎大鼠牙槽骨的Micro-CT三维模型，研究尼古丁对大鼠实验性牙周炎牙槽骨的影响
　　Micro-CT扫描建立牙周炎大鼠的牙槽骨三维模型，进行线性测量各组ABL值以评价牙槽嵴高度丧失，三维测量BMD、BVF、Tb.Th、Tb.N、Tb.Sp等指标以评价牙槽骨骨量和骨小梁改变情况。结果发现，A、B、C三组结扎侧与非结扎侧比较，结扎侧ABL值均显著高于非结扎侧，且随着尼古丁剂量增加牙槽骨高度丧失进一步加重，呈剂量依赖性。提示丝线结扎可造成大鼠牙槽骨高度降低，给予尼古丁可进一步加重这种改变。配对t检验和相关性检验结果显示，三组结扎侧的BMD、BVF、TB.N、Tb.Th均显著低于非结扎侧，且随着尼古丁给药剂量增加，双侧BMD、BVF、Tb.Th均逐渐降低，呈剂量依赖性。而三组结扎侧Tb.Sp均显著高于非结扎侧。方差分析结果显示，双侧BMD、BVF、Tb.Th、Tb.Sp组间比较差异均有统计学意义。表明丝线结扎可造成大鼠结扎侧牙槽骨松质骨骨密度、骨量、骨小梁厚度等指标降低，骨小梁分离度增加，呈现骨质疏松趋势；给予尼古丁后，可加重这些改变，并呈剂量依赖性。
　　3、免疫组化和原位杂交方法检测烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在大鼠正常及实验性牙周炎牙周组织的表达
　　在实验第14天和28天分别处死大鼠取材，常规制作石蜡切片，行免疫组化和原位杂交染色。结果发现，在正常大鼠的牙周组织中存在α7nAChR蛋白和mRNA的阳性表达，主要表达于牙龈上皮细胞、牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞；在丝线结扎造成牙周炎的牙周组织中牙周袋内壁上皮细胞、破骨细胞也等表达α7nAChR，尼古丁给药后各实验组牙周组织α7nAChR表达进一步增强。分别从蛋白和mRNA水平证实大鼠正常牙周组织中存在α7nAChR，尼古丁可上调牙周组织中α7nAChR的表达，提示α7nAChR可能参与了尼古丁对牙周炎发生和发展的影响。

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文献回顾

1 吸烟与牙周炎

2 烟碱受体

3 Micro-CT

实验一 大鼠尼古丁实验性牙周炎动物模型的建立

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

实验二 运用 Micro-CT 分析大鼠实验性牙周炎牙槽骨改变情况

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

实验三 烟碱型乙酰胆碱受体 α7 亚型在大鼠正常及实验性牙周炎牙周组织的表达

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

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