干扰素-γ对瘢痕成纤维细胞TGF-β/Smad信号通路的作用和机制研究

摘要

【研究背景】：：
　　病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩。它们的共同特点是以胶原为主的细胞外基质（ECM）代谢紊乱，导致细胞外基质大量异常沉积，造成患者外观畸形和功能障碍。研究表明，TGF-β是导致瘢痕形成的重要细胞因子，它主要通过TGF-β/Smad信号通路参与调节成纤维细胞的增殖，凋亡，转分化和胶原代谢。IFN-γ是细胞因子类药物，具有抗病毒，抗肿瘤和免疫调节的功能。除此之外，研究表明它还可以用于治疗纤维化疾病如肝纤维化，肺纤维化，病理性瘢痕和系统性硬化。但是，IFN-γ抗纤维化的具体机制如何，尤其是它对病理性瘢痕成纤维细胞TGF-β/Smad信号通路的作用和机制如何，尚未见明确报道。
　　【研究目的】
　　1.观察在病理性瘢痕成纤维细胞中，IFN-γ对TGF-β1诱导的α-SMA，MMP1，TIMP1，CTGF作用，阐明IFN-γ抗纤维化的机制。
　　2.明确IFN-γ不同作用时间和浓度时对瘢痕成纤维细胞中Smad3，Smad7表达水平的影响，初步探讨其作用机制。
　　【研究内容】：
　　1.IFN-γ对瘢痕成纤维细胞中CTGF表达的影响：分别采用实时定量PCR和蛋白印迹的方法检测CTGF的基因和蛋白水平。
　　2.IFN-γ对TGF-β1诱导后α-SMA，MMP1，TIMP1表达的影响：采用免疫荧光细胞化学和蛋白印迹的方法检测α-SMA的表达，采用实时荧光定量PCR的方法检测MMP1和TIMP1的表达。
　　3.IFN-γ不同作用时间和作用浓度对瘢痕成纤维细胞中Smad3和Smad7表达的影响：分别采用实时定量PCR和蛋白印迹的方法检测Smad3和Smad7的基因和蛋白水平。
　　4.构建YB-1的过表达载体和shRNA载体。
　　【研究结果】：：
　　1.IFN-γ可以下调基础状态下CTGF的表达量，还可以显著拮抗由TGF-β1刺激引起的CTGF表达的上调。
　　2.IFN-γ可以降低瘢痕成纤维细胞中α-SMA的表达量，还可以抑制由TGF-β1引起的α-SMA表达量的上调；IFN-γ单独作用对MMP1和TIMP1均无明显作用，但与TGF-β1联合作用时，可以拮抗TGF-β1对MMP1和TIMP1表达的影响。
　　3.IFN-γ作用后可以降低Smad3的表达量，同时升高Smad7的表达量，这种作用是通过抑制或刺激基因转录来实现的，而且呈时间和剂量依赖效应。
　　4.成功构建YB-1的过表达载体和shRNA载体。
　　【研究结论】
　　1.IFN-γ可以拮抗由TGF-β1诱导所产生的CTGF的表达上调，可能是IFN-γ抗纤维化的重要机制。
　　2.IFN-γ可以显著降低基础状态下瘢痕成纤维细胞α-SMA的表达量，并显著拮抗由TGF-β1诱导的α-SMA表达上调；它单独使用对MMP1和TIMP1无显著影响，但可以拮抗TGF-β1对MMP1和TIMP1的作用。
　　3.IFN-γ可以下调Smad3的表达同时上调Smad7的表达，从而起到拮抗TGF-β/Smad信号通路的作用。

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封面

声明

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

一、病理性瘢痕的形成机制

二、IFN-γ 治疗病理性瘢痕的研究进展

三、小结

正文

实验一 IFN-γ 对成纤维细胞 CTGF 表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 IFN-γ 对瘢痕成纤维细胞 MMP1，TIMP1，α-SMA 表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 IFN-γ 对瘢痕成纤维细胞 Smad3，Smad7表达的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验四 载体构建

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢