空肠弯曲菌PEB1介导的肠粘膜高亲和力rBCG的制备及鉴定

摘要

背景：卡介苗(Bacillus Calmette Guerin,BCG)在长期的临床应用和实验研究中被发现可以诱导机体的Th1免疫优势应答[1],不仅如此,BCG的许多成分也可以单独诱导Th1免疫优势。因此,我们设想将过敏原Der p2基因转入BCG中表达,经过免疫,机体将过敏原当作BCG的成分进行抗原提呈,选择适当的途径接种,就可能诱导出所需要的免疫状态。本课题组前期的工作已经证实:Der p2可以在原核表达系统中表达,且表达量可达总蛋白量的20％[2,3]。为了提高重组BCG与肠道黏膜的亲和力,我们选择空肠弯曲菌膜外蛋白PEB1为媒介,利用重组BCG技术,再次克隆入Der p2-rBCG中,并进行鉴定,以进一步提高疫苗的免疫效能。
　　目的：利用重组BCG技术,构建能以胞壁形式表达屋尘螨Der p2和PEB1抗原的重组BCG口服哮喘疫苗pCW-Der p2-PEB1-rBCG。
　　实验方法和结果：以pCW-Der p2质粒和pUC-PEB1质粒DNA为模板扩增基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1。将重组质粒电穿孔转入BCG感受态细胞,潮霉素抗性筛选rBCG阳性克隆。阳性rBCG经PCR特异性扩增目的基因片段,证实其中含有目的基因。用抗Der p2单克隆抗体和制备的小鼠PEB1抗血清对rBCG进行间接免疫荧光鉴定,证实其成功。
　　结论：成功地构建了胞壁表达Der p2-PEB1融合蛋白重组BCG。为基因工程疫苗的研制奠定了基础。

目录

缩略语表

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前言

文献回顾

正文

第一部分 Der p2-PEB1 融合基因大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭胞壁表达载体 pCW 的构建

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 胞壁形式表达融合蛋白Der p2-PEB1 重组 BCG 的构建和鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

致谢