U50,488H抑制缺血再灌注诱导大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制

摘要

背景
　　心肌缺血再灌注损伤（MI/R）后心肌细胞死亡的形式是梗死和凋亡。Κ-阿片受体在再灌注开始时的激活可以减少MI/R导致的心肌梗死，但Κ-阿片受体在再灌注开始时的激活能否减少心肌细胞凋亡没有报道。PI3K-Akt-eNOS-NO是许多心肌保护药物保护作用的重要作用机制，但PI3K-Akt与Κ-阿片受体介导的保护作用的关系鲜有报道。
　　目的
　　(1)观察U50,488H对缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡的影响；
　　(2)观察U50,488H对缺血再灌注损伤的心肌细胞中PI3K-Akt-eNOS-NO信号通道的影响；
　　(3)明确PI3K-Akt-eNOS-NO信号通道与U50,488H的抗心肌细胞凋亡作用关系。
　　方法
　　将60只健康成年SD大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注(I/R)生理盐水组、U50,488H组、U50,488H+Nor-BNI组、U50,488H+Wortmannin组、U50,488H+L-NAME组，每组5-6只。U50,488H为选择性κ-阿片受体激动剂，Nor-BNI为选择性κ-阿片受体拮抗剂，Wortmannin为选择性PI3K抑制剂，L-NAME为一氧化氮合成酶（NOS）抑制剂。给予30min心肌局部缺血+3h再灌注后处死动物，检测各组大鼠心梗面积、心肌细胞凋亡比例、心肌组织中Caspase-3蛋白活性、Akt、eNOS水平及其磷酸化程度、NO水平等。原代培养大鼠乳鼠心肌细胞，给予模拟的缺血再灌注（SI/R）,模拟缺血后，在模拟再灌注时分别给予正常DMEM培养液对照、U50,488H、U50,488H+Nor-BNI、U50,488H+Wortmannin、U50,488H+L-NA-ME和U50,488H+选择性Akt抑制剂处理。检测各组心肌细胞凋亡比例、心肌细胞中Caspase-3蛋白活性、Akt、eNOS水平及其磷酸化程度、培养液中NO水平等。
　　结果
　　再灌注结束后，与给予生理盐水组相比，U50,488H组的心梗面积、心肌细胞凋亡比例、心肌组织中Caspase-3蛋白活性明显下降，心肌中Akt、eNOS磷酸化水平及NO水平上升；而U50,488H+Nor-BNI组、U50,488H+Wortmannin组各项指标均与给予生理盐水组无显著差异。U50,488H+L-NAME组的Akt、eNOS磷酸化水平上升，与U50,488H组无明显差异，但心肌细胞凋亡比例及NO水平与生理盐水组无明显差异。模拟缺血再灌的心肌细胞中，与给予DMEM的对照组相比，U50,488H组的心肌细胞凋亡比例、心肌细胞中Caspase-3蛋白活性明显下降；心肌细胞中Akt、eNOS磷酸化水平及NO水平上升。U50,488H+Nor-BNI组、U50,488H+Wortmannin组、U50,488H+选择性Akt抑制剂组各项指标均与给予生理盐水组无显著差异。U50,488H+L-NAME组的Akt、eNOS磷酸化水平上升，与U50,488H组无明显差异，但心肌细胞凋亡比例及NO水平与生理盐水组无明显差异。
　　结论
　　(1)U50,488H可减少在体大鼠心脏局部心肌缺血再灌注损伤（MI/R）和原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤（SI/R）诱导的心肌细胞凋亡。
　　(2)U50,488H可增加在体大鼠心脏局部心肌缺血再灌注损伤（MI/R）和原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤（SI/R）中心肌细胞Akt和eNOS的磷酸化，进而增加NO的产生，这一作用可能介导了U50,488H后处理的抗心肌细胞凋亡作用。
　　(3)通过观察U50,488H对缺血再灌注心肌中Akt、eNOS磷酸化及NO含量的影响和PI3K、Akt、NO选择性抑制剂对U50,488H后处理抗凋亡作用的影响，证实U50,488H后处理的抗凋亡作用依赖于其激活PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路的作用。

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前言

文献回顾

一 .缺 血 再 灌 注 损 伤 与 心 肌 细 胞 凋 亡

二 、 阿 片 受 体 在 心 脏 、 血 管 的 分 布 及 其 生 理 作 用

三 、 Κ-阿 片 受 体 的 心 肌 保 护 作 用

四 、 后 处 理

五 ． NO 对 心 肌 细 胞 凋 亡 的 影 响

正文

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

附录

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