噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26和Connexin31表达的影响

摘要

实验一小鼠噪声性耳聋模型的建立
　　目的：建立小鼠噪声性耳聋模型，为后续实验中观察噪声后缝隙连接蛋白Cx26和Cx31在小鼠耳蜗外侧壁的表达变化奠定实验基础；
　　方法：随机将26只成年雄性Balb/c小鼠分为对照组13只和噪声组13只。噪声组给予115dB白噪声，每天6小时，共2天；噪声结束后取耳蜗制备冰冻切片行HE染色；取耳蜗外侧壁组织行透射电镜观察；测量听性脑干反应（auditory brainstem response，ABR）；对照组无处理。
　　结果：HE染色显示噪声暴露后，外侧壁螺旋韧带处细胞胞核染色加深，胞核线条僵硬，胞浆中空泡形成；血管纹未见明显肿胀，可见较大的细胞间隙形成；透射电镜观察显示噪声组小鼠耳蜗外侧壁组织细胞水肿，胞浆内线粒体极度肿胀，大量空泡形成，部分空泡内尚可见残存线粒体结构；噪声组小鼠的ABR反应阈值在噪声后显著升高，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。
　　结论：本实验可以建立稳定且可靠的噪声性耳聋模型，为进一步观察噪声对耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Cx26和Cx31表达的影响奠定实验基础。
　　实验二 Connexin26在噪声性耳聋小鼠耳蜗外侧壁的表达
　　目的：观察Cx26在噪声性耳聋小鼠耳蜗外侧壁表达的变化。
　　方法：取对照组和噪声组小鼠的耳蜗组织冰冻切片，行免疫组织化学染色法观察噪声前、后耳蜗外侧壁处Cx26表达的变化；行间接免疫荧光染色观察噪声后Cx26细胞内转运相关蛋白——微管蛋白β-Tubulin的形态学变化；分别提取对照组和噪声组小鼠耳蜗外侧壁组织总RNA，实时荧光定量PCR技术检测Cx26编码基因Gjb2 mRNA表达变化。
　　结果：对照组和噪声组小鼠耳蜗螺旋韧带和血管纹基底细胞层均可见Cx26表达；噪声组小鼠耳蜗外侧壁Cx26表达较对照组减弱；噪声后耳蜗外侧壁细胞微管排列紊乱，局部出现浓集现象；噪声组小鼠耳蜗外侧壁组织Gjb2的mRNA表达量低于对照组。
　　结论：噪声引起小鼠耳蜗外侧壁Cx26表达下调，Cx26可能参与了噪声性耳聋的发病机制。
　　实验三 Connexin31在噪声性耳聋小鼠耳蜗外侧壁的表达
　　目的：观察噪声对耳蜗外侧壁Cx31表达的影响。
　　方法：取对照组和噪声组小鼠的耳蜗冰冻切片，行免疫组织化学荧光染色法观察耳蜗外侧壁处Cx31表达的变化；分别提取对照组和噪声组小鼠耳蜗外侧壁组织总RNA，实时荧光定量PCR技术检测Cx31编码基因Gjb3 mRNA表达变化。
　　结果：对照组和噪声组小鼠耳蜗螺旋韧带均可见Cx31表达，血管纹处未见阳性表达，但噪声组小鼠耳蜗外侧壁免疫荧光染色阳性反应较对照组减弱；噪声组小鼠耳蜗外侧壁组织Gjb3的mRNA表达量明显低于对照组。
　　结论：噪声引起小鼠耳蜗外侧壁Cx31表达下调，Cx31可能参与了噪声性耳聋的发病过程。

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文献回顾

1 耳蜗外侧壁解剖生理

2 噪声性耳聋机制研究进展

3 缝隙连接蛋白研究进展

正文

实验一 小鼠噪声性耳聋模型

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 缝隙连接蛋白Connexin26在噪声性耳聋小鼠耳蜗外侧壁的表达

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 缝隙连接蛋白Connexin31在噪声性耳聋小鼠耳蜗外侧壁的表达

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢