降低耳蜗Connexin26蛋白表达增加小鼠对噪声的易感性

摘要

本文主要从以下两个部分展开论述：
　　第一部分 耳蜗Connexin26蛋白表达降低小鼠模型的建立及鉴定
　　目的：
　　为研究Cx26基因突变导致耳聋的机制，建立及鉴定耳蜗Connexin26蛋白表达降低小鼠模型。
　　方法：
　　通过遗传学方法将Cx26loxP/loxP小鼠和Rosa26CreER小鼠杂交，在F1代获得基因型为Cx26loxP/--;Rosa26CreER的杂合小鼠，再与Cx26loxP/loxP小鼠杂交在F2代就出现Cx26loxP/loxP;Rosa26CreER小鼠，即条件诱导性Cx26基因敲除小鼠，大量繁殖此种小鼠。小鼠出生后第15天应用PCR基因分型（genotyping）筛选符合基因型Cx26loxP/loxP;Rosa26CreER的小鼠，随机分为模型组(n=6)和空白对照组（n=6）。模型组在小鼠出生后第18天给予单次他莫西芬（tamoxifen，TMX）皮下注射，TMX溶于脂肪乳中，每10g体重给予TMX1.5mg，空白对照组不给药。蛋白印迹杂交法（western blot）和免疫组织化学（Immunohistochemistry）用来确定Cx26蛋白在这种小鼠模型耳蜗中的表达情况，同时使用听性脑干反应（auditory brainstem responses,ABR）检测小鼠出生后第30天的听力阈值改变。
　　结果：
　　PCR基因分型确定实验动物均符合基因型Cx26loxP/loxP;Rosa26CreER；western blot和免疫组化结果确定模型组小鼠耳蜗Cx26蛋白表达与空白对照组小鼠相比有所降低，差异有统计学意义（P<0.05）；ABR结果显示两组小鼠ABR听力阈移差异无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　成功建立及鉴定了耳蜗Connexin26蛋白表达降低小鼠模型。
　　第二部分 降低耳蜗Connexin26蛋白表达增加小鼠对噪声的易感性
　　目的：
　　研究降低耳蜗Connexin26蛋白表达是否增加小鼠对噪声的易感性。
　　方法：
　　将符合基因型Cx26loxP/loxP;Rosa26CreER的小鼠随机分为4组:1)Control组，空白对照；2）TMX组，小鼠出生后第18天给予单次TMX（1.5mg/10g）皮下注射；3）ZS组，小鼠出生后第24天开始暴露于100dBSPL稳态白噪声中，每天连续8小时,持续暴露7天；4）TMX+ZS组，小鼠出生后第18天给予单次TMX(1.5mg/10g)皮下注射，第24天开始暴露于100dBSPL稳态白噪声中，每天连续8小时,持续暴露7天。使用western blot观察小鼠耳蜗Cx26蛋白表达量的变化，ABR检测小鼠出生后第30天的听力阈值改变。
　　结果：
　　westernblot结果显示，TMX组、ZS组、TMX+ZS组与Control组相比，Cx26蛋白表达量都下降，差异有统计学意义（P<0.05）,但这三组之间两两比较，差异无统计学意义（P>0.05）；ABR检测结果显示TMX+ZS组的听力损失在所有检测频率8kHz、16kHz、32kHz上都比其余三组更明显，差异有统计学意义（P<0.05）,其余各组间两两比较除Control组与TMX组外差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　降低耳蜗Connexin26蛋白表达增加小鼠对噪声的易感性。

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英文缩略语简表

中文摘要

英文摘要

第一部分耳蜗Connexin26蛋白表达降低小鼠模型的建立及鉴定

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分降低耳蜗Connexin26蛋白表达增加小鼠对噪声的易感性

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述

参考文献

致谢