红褐色乌苏里貉TYRP1基因的克隆及表达水平研究

摘要

为了探讨突变红褐色乌苏里貉和野生型乌苏里貉TYRP1基因的核酸序列以及TYRP1基因在两种毛色貉中的表达水平，本试验以青岛莱西万盛农业有限公司的野生型乌苏里貉和红褐色乌苏里貉为研究对象，利用克隆测序技术，成功克隆了两种毛色貉TYRP1基因的CDS序列，进行了序列对比分析，并与其他物种的同源性进行了比较。利用实时荧光定量PCR技术研究了TYRP1基因在野生型乌苏里貉与突变红褐色乌苏里貉中的mRNA表达水平差异。以期为TYRP1基因的功能分析及红褐色乌苏里貉毛色突变分子遗传机制的研究提供一定的理论基础。 本试验成功克隆得到野生型乌苏里貉和红褐色乌苏里貉TYRP1基因全长CDS序列，利用DNAMAN软件进行对比分析，结果显示两种毛色貉序列完全匹配，全长均为1614bp，包括完整的开放阅读框，共编码537个氨基酸。与其他物种进行同源性比较分析，结果显示红褐色乌苏里貉TYRP1基因编码序列与狗、猪、绵羊、小鼠、人、牛、猫、马、虎鲸和黑猩猩核酸序列高度同源，同源性分别为99.07％、90.56％、89.64％、83.22％、88.90％、89.39％、90.87％、88.63％、90.25％和88.65％，表现出了高度的保守性。对荧光定量数据结果进行分析，利用SPSS软件进行独立样本T检验，结果表明TYRP1基因在两种毛色的貉皮肤组织中均可稳定表达，利用F=(1+E)-△△Ct计算可知TYRP1基因在红褐色乌苏里貉中的表达量是野生型乌苏里貉的0.93倍，但差异不显著(P＞0.05)。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

1 我国貉的种质资源及相关研究

1．1 我国貉的特征及习性

1．2 我国貉养殖业的发展历程及现状

1．3 红褐色乌苏里貉的研究进展

2 基因测序技术

2．1 基因测序技术的发展及应用

2．2 基因测序技术的发展前景

3 荧光定量PCR及其应用

3．1 荧光定量PCR简介

3．2 相关概念

3．3 荧光定量PCR的定量方法

3．4 荧光定量PCR的应用

4 TYRP1基因及其研究进展

4．1 TYRP1基因结构

4．2 TYRP1基因的作用

4．3 TYRP1基因相关研究进展

5 本研究的目的意义

第二章 红褐色乌苏里貉TYRP1基因的克隆及序列分析

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂

1．4 试剂的配制

2 试验方法

2．1 引物的设计

2．2 基因组DNA的提取及质量检测

2．3 PCR扩增反应体系和反应条件

2．4 PCR产物回收

2．5 克隆

2．6 皮肤组织总RNA的提取及质量检测

2．7 反转录第一链cDNA

2．8 RT-PCR及测序

2．9 目的片段的拼接

3 结果与分析

3．1 DNA的质量检测

3．2 PCR扩增结果

3．3 总RNA的质量检测

3．4 RT-PCR分析

3．5 测序结果及序列拼接

3．6 序列分析

4 讨论

4．1 TYRP1基因与毛色的相关性

4．2 红褐色乌苏里貉与其他物种的同源性

第三章 红褐色乌苏里貉TYRP1基因表达水平研究

1 试验材料

2 试验方法

2．1 荧光定量PCR引物的设计

2．2 荧光定量PCR

2．3 数据分析

3 结果与分析

3．1 两种毛色貉TYRP1基因和β-actin基因RT-PCR

3．2 TYRP1基因和β-actin基因扩增曲线和熔解曲线

3．3 两种毛色貉TYRP1基因表达量的比较

4 讨论

4．1 影响荧光定量结果的因素

4．2 TYRP1基因在两种毛色貉中mRNA表达水平

结论

参考文献

英文缩略词表

致谢

作者简历

攻读硕士期间科研学术成果