红褐色乌苏里貉Agouti基因与KITLG基因的克隆及表达水平研究

摘要

为了探讨红褐色乌苏里貉和野生型乌苏里貉Agouti基因和KITLG基因的CDS序列以及其在两种毛色貉中的表达水平，本研究以青岛莱西万盛农业有限公司的野生型乌苏里貉和红褐色乌苏里貉为研究对象，利用克隆测序技术，成功克隆了两种毛色貉Agouti基因和KITLG基因的CDS序列，并对所得序列进行了比对分析及与其他物种的同源性比较。利用实时荧光定量PCR技术对Agouti基因和KITLG基因和在红褐色乌苏里貉与野生型乌苏里貉中的mRNA表达水平差异进行了探究。通过上述研究以期为Agout基因和KITLG基因的功能分析及红褐色乌苏里貉毛色突变分子遗传机制的研究提供一定的理论基础。
　　试验成功克隆了野生型乌苏里貉和红褐色乌苏里貉 Agouti基因全长为396 bp的CDS序列和KITLG基因全长为825 bp CDS序列，并发现两种貉KITLG基因741 bp的转录本。利用 DNAMAN软件进行比对分析，结果显示一只红褐色乌苏里貉 Agouti基因编码序列的在130 bp碱基由G突变为T，而两种毛色貉KITLG基因序列完全匹配。将两种基因的CDS序列与其他物种进行同源性比较分析，发现红褐色乌苏里貉Agouti基因与狗、猫、猪、小鼠、黑猩猩、牛、绵羊、马、虎鲸以及人等物种的同源性均在80.60％以上，KITLG基因与上述物种的同源性均在80.85%以上，两者均具有高度的保守性。对荧光定量数据结果进行分析，利用SPSS软件进行独立样本T检验，结果表明Agouti基因与KITLG基因在两种毛色的貉皮肤组织中均可稳定表达，利用F=(1+E)－△△Ct计算可知 Agouti基因在红褐色乌苏里貉中的表达量是野生型乌苏里貉的1.09倍，而KITLG基因在红褐色乌苏里貉中的表达量是野生型乌苏里貉的0.89倍，但两者差异都不显著（P>0.05）。

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前言

第一章 文献综述

1 我国貉的生物学特征及相关研究

2 DNA测序技术

3 荧光定量PCR及其应用

4 Agouti基因及KITLG基因简介

5 本研究的目的意义

第二章 红褐色乌苏里貉Agouti基因和KITLG基因CDS序列的克隆及分析

1 试验材料

2 试验方法

3 结果与分析

4 讨论

第三章 红褐色乌苏里貉Agouti基因与KITLG基因表达水平研究

1 试验材料

2 试验方法

3 结果与分析

4 讨论

结论

参考文献

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致谢

作者简历

攻读硕士期间科研学术成果