口咽癌和口腔癌HPV感染状况及与预后关系的研究

摘要

口咽癌是主要发生于舌根、软腭、扁桃体、咽侧壁等部位的鳞状细胞癌。口腔癌是主要发生于舌体、颊粘膜、硬腭和牙龈等口腔黏膜的鳞状细胞癌，严重影响人们的生命质量。大量研究指出吸烟、饮酒、咀嚼槟榔及口腔不良修复体等是导致其发病的主要危险因素，然而有报道显示15％-20%的患者无吸烟和饮酒史，提示存在导致肿瘤发生发展及转归的其它潜在致病要素。在1983年Stina Syrjanen教授发现人类乳头状瘤病毒（Human papillomavirus, HPV）感染与头颈部鳞状细胞癌的发病存在明显的相关性，随后在口咽及下咽等部位的鳞癌组织中相继检测出HPV，因此对HPV的研究受到越来越多的关注。当今研究主要围绕HPV感染与口咽癌的发病展开，但多集中在西方发达国家，缺乏针对中国人的研究报道，而且鲜见HPV与口腔癌的研究。2016年最新第八版修订的美国癌症分期联合委员会（American Joint Committee Cancer, AJCC）癌症分期手册和2016年美国国立综合癌症网络（NationalComprehensive Cancer Network, NCCN）头颈部肿瘤临床实践指南均指出P16蛋白的表达是检测HPV感染及评估预后的理想指标。因此本课题对188例罹患口咽癌或口腔癌的中国患者的病理标本进行P16蛋白检测，针对P16蛋白的不同表达情况与临床病理学指标及预后转归的关系进行了回顾性研究并构建预测模型（Nomogram,诺谟图）。随后通过细胞实验对回顾性研究结果进行验证，充实了中国地区关于HPV与口咽癌和口腔癌相关性的研究资料。
　　目的：
　　1.检测P16蛋白在口咽癌和口腔癌中的表达，探讨P16蛋白不同表达情况与口咽癌和口腔癌患者临床病理学指标之间的关系并分析其临床意义。
　　2.术后随访并构建预测模型（Nomogram，诺谟图）探讨影响口咽癌和口腔癌患者术后总体生存率（Overall Survival, OS）及无瘤生存率（Disease-free Survival, DFS）的独立危险因素，并进一步探讨P16蛋白阳性的口咽癌和口腔癌患者术后对放化疗的敏感性差异。
　　3.培养HPV阳性SCC090细胞系和HPV阴性Fadu细胞系，在生长对数期行6Gyγ射线照射，验证回顾性研究中患者对放疗敏感性差异的结论。
　　方法：
　　1.收集93例口咽癌和95例口腔癌患者临床病理学资料及标本。
　　2.对188例鳞癌标本进行P16蛋白免疫组织化学染色（Immunohistochemistry, IHC）。2名病理科专家阅片并确定阳性表达组。统计学分析P16蛋白不同表达情况与口咽癌和口腔癌患者临床病理学指标之间的关系并阐述其临床意义。
　　3.通过电话、写信、患者门诊复查记录以及科室的定期随访记录等方式收集口咽癌和口腔癌患者术后详细随访资料。
　　4.以OS和DFS为指标进行单因素和多因素Cox比例风险模型生存分析，确定影响口咽癌和口腔癌患者预后的独立危险因素并绘制生存曲线。
　　5.基于生存分析确定的独立危险因素构建预测模型（Nomogram，诺谟图），用于个体化预测口咽癌和口腔癌患者预后。
　　6. CCK8实验、流式细胞术检测HPV阳性SCC090和HPV阴性Fadu口咽鳞癌细胞系接受6Gy单剂量γ射线照射后细胞活力及凋亡情况。
　　6.统计学方法：?2检验；Kaplan-Meier法、Log-rank检验、多因素Cox比例风险模型；Nomogram.
　　结果：
　　1.口咽癌中P16蛋白阳性率为25.8%（24/93）。与P16蛋白阴性组相比，患者的年龄、吸烟、病理学分化、N分期以及TNM临床分期具有统计学意义（P＜0.05）。口腔癌中P16蛋白阳性率为9.5%（9/95）。与P16阴性组相比，吸烟，N分期和TNM临床分期具有统计学意义（P＜0.05）。
　　2.口咽癌患者单因素生存分析得出T分期、病理学分级、P16蛋白表达和术后治疗方案（单纯手术、手术＋单纯放疗和手术+同期放化疗）影响口咽癌的OS。其中，P16蛋白阳性组OS明显高于P16阴性组，Log-rank检验具有统计学意义（P=0.004）。多因素Cox比例风险模型分析提示T分期、P16蛋白的表达和术后治疗方案是影响口咽癌OS的独立危险因素。另外，单因素分析得出T分期、TNM临床分期和P16蛋白表达影响口咽癌患者的DFS。其中，P16蛋白阳性组DFS高于P16阴性组，Log-rank检验具有统计学意义（P=0.022）。多因素Cox比例风险模型分析得出P16蛋白表达是影响口咽癌DFS的独立危险因素。
　　3.口腔癌患者单因素生存分析得出年龄、吸烟、T分期和TNM临床分期影响口腔癌患者OS。其中，P16蛋白阴性组OS高于P16蛋白阳性组，Log-rank检验不具有统计学意义（P=0.343）。多因素Cox比例风险模型分析提示吸烟是影响口腔癌OS的独立危险因素。另外，单因素分析得出年龄、吸烟、T分期和P16蛋白表达影响口腔癌的术后DFS，P16蛋白阴性组术后DFS高于P16蛋白阳性组，Log-rank检验具有统计学意义（P=0.042）。多因素Cox比例风险模型生存分析得出年龄、吸烟和P16蛋白表达是影响口腔癌DFS的独立预后因素。
　　4.口咽癌术后单纯放疗和同期放化疗组中P16蛋白阳性表达的患者OS明显高于P16蛋白阴性表达的患者，表现出较高的放化疗敏感性，Log-rank检验均具有统计学意义。口腔癌术后单纯放疗和同期放化疗组中P16蛋白阴性表达的患者OS略高于P16蛋白阳性表达的患者，Log-rank检验均不具有统计学意义。
　　5.口咽部HPV阳性SCC090细胞系和HPV阴性Fadu细胞系接受单剂量γ射线6Gy，培养24h、48h和72h后，CCK8实验显示，SCC090细胞活力明显低于Fadu且差异具有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞术显示放疗后24h，SCC090细胞系凋亡率为16.3%， Fadu细胞系凋亡率为7.1%，提示SCC090细胞系对放疗更加敏感，与回顾性研究相符。
　　结论：
　　HPV感染是口咽癌和口腔癌的重要致病因素，P16蛋白可以作为检测HPV感染的理想替代物。P16蛋白在口咽癌中的阳性率明显高于口腔癌，与现有研究结果相一致。口咽癌患者中P16蛋白阳性表达者预后和术后放化疗效果均明显优于P16蛋白阴性表达者，且在细胞实验中同样证实P16蛋白阳性SCC090细胞系比P16蛋白阴性Fadu细胞系对放疗更敏感，因此P16蛋白表达可以作为口咽癌患者预后评估的重要指标。基于生存分析确定的独立危险因素所构建的预测模型（Nomogram，诺谟图），可用于个体化预测口咽癌和口腔癌患者预后，将来可以通过多中心协作、加大样本量进一步完善模型，使其更具科学性。

目录

声明

缩略语表

前言

文献回顾

第一部分 HPV回顾

第二部分HPV相关口咽癌与口腔癌概述

第三部分HPV阳性口咽癌和口腔癌患者特点

第一部分 HPV在口咽癌和口腔癌中的表达及临床意义

1.研究对象

2 研究方法

3 研究结果

4 讨论

第二部分HPV感染相关口咽癌和口腔癌预后研究

1. 研究对象

2. 研究方法

3. 研究结果

4.讨论

第三部分 HPV相关口咽癌和口腔癌术后放化疗敏感性回顾性研究

1.研究对象

2.研究方法

3. 研究结果

4. 讨论

第四部分 HPV相关口咽癌放疗敏感性的体外实验

1.研究对象

2.研究方法

3.研究结果

4.讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢