不同品系比格犬部分血液学指标及遗传多态性分析

摘要

近年来，随着生物学领域研究的迅速发展，实验用比格犬（Beagle）在医学领域研究中的作用越来越突出，对比格犬质量的要求也越来越高，因此保证比格犬优良品质和高重复性的生物学特性显得十分重要。故本试验进行不同体型比格犬部分血液学指标的检测及遗传多态性分析，在保持种群稳定的基础上以期获得高质量的实验用比格犬并为动物模型的筛选打基础。
　　试验一不同品系比格犬不同生长时期血液生化指标的检测
　　筛选出不同体型的比格犬，大中小体型种犬30只，公母各半；按生理期不同选取泌乳期母犬30只；怀孕期母犬30只；育成犬30只，公母各半。本试验对比格犬的14项血液生化指标进行检测分析。结果：获得不同体型种犬、不同生理时期比格犬血液生化指标的平均值及标准差范围。试验结果表明泌乳期母犬血清中TG的浓度明显低于其他不同生理期的比格犬（P＜0.05）；泌乳期母犬和怀孕期母犬血清中 T-Bil的浓度明显显低于其他生理期的比格犬（P＜0.05）。T-Pro、Alb、BUN、UA、Cre、T-cho、CPK、GOT、GPT、Ca、TG、GLU这12项生化指标在不同品系、不同生理期的变化不大，并没有显著差异，可以作为标准参考值。本研究结果可作为新药比格犬长毒试验中各项测试的正常值参考。
　　试验二不同品系比格犬外周血单核细胞及T淋巴细胞亚群的检测
　　通过对健康成年比格犬三个品系：大体型（Charles River）、中体型（Cavens）、小体型（自繁）外周血单核细胞及T淋巴细胞免疫表型分布的调查，建立相应的正常参考范围。选择健康成年比格犬三个品系各30只，血样用三色特异性T淋巴细胞亚群及单色单核细胞荧光抗体进行荧光标记，流式细胞仪检测 CD14、CD3、CD4、CD8标记的样品。结果(1)成年健康比格犬外周血白细胞中单核细胞占比分析发现大体型比格犬明显高于其他两组有显著差异；(2) CD4+淋巴细胞在 T淋巴细胞中占比分析发现大体型比格犬明显高于其他两组有显著差异；(3) CD8+淋巴细胞在T淋巴细胞中的占比分析发现中体型比格犬明显高于其他两组有显著差异；(4) CD4+/CD8+分析发现小体型明显高于其他两组有显著差异。由实验得出结论：大体型比格犬自身免疫能力比较强，小体型比格犬具有数据比较稳定、体型小、容易操作等优点，小体型比格犬更适合做实验动物。建立了各个品系的淋巴细胞免疫表型及单核细胞的参考范围。
　　试验三不同品系比格犬血清肿瘤标志物含量检测
　　本研究拟对大、中、小体型三个品系的健康成年比格犬血清肿瘤标志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199进行检测，用犬肿瘤标志物AFP、CEA、CA125、CA153、CA199 ELISA试剂盒，对97只健康成年大体型比格犬、228只中体型比格犬、63只小体型比格犬的血清进行相关肿瘤标志物浓度测定，为比格犬肿瘤模型筛选提供参考。试结果表明，小体型比格犬血清中AFP、CA125、CA153、CEA的浓度明显低于其他两个品系犬（P＜0.05）；而CA199的浓度明显高于中体型比格犬（P＜0.05）。大体型比格犬血清中AFP、CEA、CA125、CA153的浓度最高，小体型比格犬血清中 CA199最高，推测认为大体型比格犬患消化系统和生殖系统肿瘤的风险较高，小体型比格犬患腺癌的风险较高，也为动物模型的开展提供基础数据。
　　试验四不同品系比格犬遗传多态性分析
　　本研究拟对大、中、小体型三个品系的健康成年比格犬遗传多样性进行检测，分析该群体在DNA水平上的遗传多样性。采用国际动物遗传学会（ISAG）及相关文献中筛选出的8对微卫星引物，对大、中、小体型比格犬各30只（15只公犬，15只母犬）进行了相应的分析。结果，总共有18个等位基因被检测到，每个微卫星座位的等位基因数由2个到3个，等位基因数的平均值为2.25，期望杂合度和多态信息含量的平均值分别为0.4633和0.3771。将大、中、小体型比格犬的遗传距离进行分析表明，群体间的遗传距离为0.2～0.4。结果表明，大、中、小体型比格犬群体的遗传多样性偏低，应保持并继续纯化种群。

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第一章 文献综述

1.实验用比格犬简介

2.血生化

3.流式细胞术

4.肿瘤标志物

5. 不同品系比格犬遗传多态性分析

6.本研究的目的和意义

第二章 不同品系比格犬生化指标的检测

1 材料与方法

2 结果

3讨论

4 小结

第三章 不同品系比格犬单核细胞及淋巴细胞亚群的检测

1 材料与方法

2 结果

3讨论

4 小结

第四章 不同品系比格犬血清肿瘤标志物的检测

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第五章 不同品系比格犬微卫星DNA遗传多态性研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

全文结论

参考文献

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致谢

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