利用细胞融合技术构建富含EPA/DHA异养微藻株的研究

摘要

n-3族高度不饱和脂肪酸(PUFAs),尤其是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)是具有重要生理功能的生物活性物质.它们在水产养殖中对鱼、虾、贝幼体的生长和发育极为重要,缺乏EPA和DHA会造成幼体生长迟缓和大量死亡.已有的研究证实,EPA和DHA对促进人类大脑发育,预防凡脏病、动脉粥样硬化、癌症、炎症、类风湿关节炎、哮喘、糖尿病等,也有良好效果.为获取优质EPA/DHA,作者以卡德藻和绿色巴夫藻为材料,利用细胞融合 技术进行构建富含EPA/DHA异养微藻株的研究.1、原始藻株的筛选;2、原始澡株原生质体 的制备与再生;3、原生质体的融合与融合子的筛选.综上所述,该研究筛选到了一株富含EPA/DHA的异养微藻株,定名为T.sp-1.

目录

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缩写词表

1序言

1.1研究的目的及意义

1.1.1 PUFAs(EPA/DHA)的应用价值和生理活性

1.1.2 PUFAs(EPA/DHA)在水产养殖中的应用价值

1.1.3 PUFAs(EPA/DHA)的来源

1.2海藻原生质体融合与杂交技术的研究进展

1.2.1海藻原生质体的制备与培养技术

1.2.2海藻原生质体融合与杂交技术

1.2.3海藻原生质体融合与杂交技术目前存在的问题

1.3结语

2 11种微藻EPA/DHA组成及融合原始藻株确定的研究

2.1材料与方法

2.1.1微藻藻种

2.1.2微藻的培养和藻细胞的收集

2.1.3微藻总脂含量的测定

2.1.4微藻脂肪酸的皂化和酯化

2.1.5微藻脂肪酸甲酯的分析

2.1.6细胞处理方法和提取方法对绿色巴夫藻总脂含量测定的影响

2.2结果

2.2.1微藻的生长速率

2.2.2微藻的总脂含量

2.2.3微藻的EPA/DHA含量

2.2.4不同细胞破碎方法对绿色巴夫藻总脂含量测定的影响结果

2.2.5不同提取方法对绿色巴夫藻总脂含量测定的影响结果

2.3讨论

2.4结语

3卡德藻和绿色巴夫藻两原始藻株原生质体的制备与再生研究

3.1材料与方法

3.1.1仪器、试剂与酶

3.1.2原始藻株及其培养

3.1.3原始藻株生长曲线的测定

3.1.4原生质体的制备方法

3.1.5原生质体得率的测定

3.1.6卡德藻细胞壁酶解条件的测定

3.1.7原始藻株酶解曲线的测定

3.1.8原生质体活力的测定

3.1.9卡德藻原生质体细胞壁消化程度的测定

3.1.10卡德藻原生质体再生率的测定

3.2结果

3.2.1原始藻株生长曲线的确定

3.2.2卡德藻细胞壁酶解条件的确定

3.2.3原始藻株酶解曲线的确定

3.2.4原生质体活力的测定结果

3.2.5卡德藻原生质体细胞壁的消化程度

3.2.6卡德藻原生质体再生率的测定结果

3.3讨论

3.4结语

4卡德藻和绿色巴夫藻原生质体的融合与融合子的筛选和鉴定

4.1材料与方法

4.1.1仪器和药品

4.1.2藻株

4.1.3培养基和试剂

4.1.4融合方法

4.1.5融合子的筛选

4.1.6融合子在自养、兼养和异养条件下生长速率、总脂含量和脂肪酸组成的比较

4.2结果与讨论

4.2.1原生质体的融合

4.2.2融合子选择系统的确立

4.3结语

5结论

致谢

参考文献

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