丙泊酚、咪唑安定对大鼠肢体缺血再灌注后肾肺细胞凋亡的影响及机制探讨

摘要

目的：本实验用TUNEL法、电泳法及免疫组织化学等技术观察在体大鼠肢体缺血再灌注后肾脏、肺脏损伤发生过程中，细胞凋亡以及Bcl-2、caspase-3蛋白质表达的变化，采血取上清检测血肌酐、尿素氮水平，并探讨临床麻醉常用药物丙泊酚、咪唑安定的干预效应及机制，为其在临床应用中提供一定的实验支持。 方法：健康雄性SD大鼠，10％的乌拉坦(1.0g·kg-1)腹腔注射麻醉，随机分为6组：①对照组或假手术组(sham组，n=6)，只进行麻醉并解剖股血管及股神经，不做其它处理。②肢体缺血1小时再灌注4小时组(I1h组，n=6)。③肢体缺血3小时再灌注4小时组(I3h组，n=6)。④肢体缺血3小时再灌注4小时+丙泊酚组(Pro组，n=6)。⑤肢体缺血3小时再灌注4小时+咪唑安定组(Mizo组，n=6)。⑥肢体缺血3小时再灌注4小时+10％的脂肪乳组(Intr组，n=6)。缺血前10分钟静脉注射丙泊酚(生理盐水稀释至0.5％)5mg·kg-1，然后以10mg·kg-1·h-1持续输注至实验结束；咪唑安定(生理盐水稀释至0.05％)0.5mg·kg-1，然后以0.2mg·kg-1·h-1持续输注至实验结束；Intr组给予等量的10％的脂肪乳(生理盐水稀释至5％)；I1h组和I3h组给予生理盐水。实验结束，颈动脉放血处死大鼠，同时留取血液，离心取上清-20℃冰箱保存测血肌苷和尿素氮值；分别取肺组织及肾组织采用TUNEL法观察细胞凋亡的发生情况；免疫组织化学观察Bcl-2、caspase-3蛋白质表达情况；并提取组织DNA进行琼脂糖凝胶电泳观察其变化。 结果：①肾功能即血肌酐，尿素氮结果：各组测量结果均在正常值范围。②TUNEL结果：sham组几乎未见凋亡细胞。比较凋亡指数(AI)：其它各组与sham组比较均有统计学意义(P＜0.01)；I1h组与I3h组比较差别有显著性(P＜0.05)；Mizo组与I3h组比较差别有显著性(P＜0.01)；Pro组与Intr组比较有统计学意义(P＜0.01)；Mizo组凋亡指数虽比Pro组高，但两组比较差别无显著性(P＞0.05)；Intr组与I3h组比较差别无显著性(P＞0.05)。③组织中Bcl-2、caspase-3的表达：免疫组织化学切片以平均光度、阳性单位为指标进行半定量分析。Bcl-2、caspase-3在对照组表达较低，相关性分析caspase-3表达阳性单位与AI呈正相关。Bcl-2表达平均光度、阳性单位半定量分析：其它组与sham组比较均有统计学意义(P＜0.01)；I1h组与I3h组比较差别有显著性(P＜0.01)；Mizo组与I3h组比较差别有显著性(P＜0.01)；Pro组与Intr组比较有统计学意义(P＜0.01)；Mizo组与Pro组两组比较差别无显著性(P＞0.01)；Intr组与I3h组比较差别无显著性(P＞0.05)。caspase-3表达平均光度、阳性单位半定量分析比较结果与Bcl-2相同。④组织电泳结果：sham组肾脏肺脏几乎未见梯形条带，I1h组肾脏和I3h组肺脏凋亡发生较明显，而其余各组均隐约可见凋亡较典型的条带，实验重复结果相似。 结论：①大鼠肢体缺血再灌注可造成远隔器官肺脏、肾脏细胞凋亡的发生。②丙泊酚及咪唑安定对大鼠肢体缺血再灌注引起的肺脏、肾脏细胞凋亡有一定的抑制作用，即均能减轻一定的损伤而起保护作用。

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结论

综述

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