脑慢性低灌注诱导的行为学，一氧化氮和突触素变化及其与阿尔茨海默特异性病理学变化的关系

摘要

目的：(1)结扎大鼠双侧颈总动脉，建立脑慢性低灌实验动物模型；(2)对照研究脑缺血后不同时间大鼠阿尔茨海默病(AD)和血清一氧化氮(NO)的改变以及其二者的关系；(3)对照研究不同脑缺血时间大鼠AD和突触素的改变以及其二者的关系；(4)研究脑缺血后不同时间对大鼠行为学及脑组织结构的影响，以及探讨脑慢性低灌注与AD的关系。 材料与方法：雄性四月龄Wistar大鼠36只，随机分为三组，即12周组、16周组、20周组；每组内再分为手术组6只(脑缺血组)，假手术组6只(同龄对照组)，以消除年龄差异。脑缺血组分离并结扎大鼠双侧颈总动脉，假手术组分离大鼠双侧颈总动脉但不结扎。各组大鼠分别于脑缺血12周、16周和20周进行Morris水迷宫实验。各组大鼠分别于脑缺血12周、16周和20周在Morris水迷宫测试实验之后，腹腔动脉采血，采用亚硝酸盐分光光度比色法检测血清NO浓度，采用放射免疫方法检测血清β-淀粉样蛋白浓度；处死动物，取大鼠脑组织，采用免疫组织化学法染色显示脑组织β-淀粉样蛋白、磷酸化Tau蛋白及突触素免疫，通过图像分析计算平均灰度值，比较各组间免疫阳性染色结果(根据图象分析系统，灰度值与染色阳性程度成反比)。 结果：12周、16周和20周组Morris水迷宫试验的时间潜伏期各脑缺血组均较其同龄对照组显著延长(P＜0.05)，各实验组距离潜伏期较同龄对照组亦显著延长(P＜0.05)。各脑缺血组采用方差分析LSD组间比较发现：脑缺血16、20周组与脑缺血12周组相比，大鼠寻找平台的时间潜伏期均显著缩短(P＜0.05)；而脑缺血20周组实验组大鼠寻找平台的时间潜伏期与缺血16周组实验组相比，无统计学意义(P＞0.05)。距离潜伏期的统计比较与时间潜伏期比较的结果相同。 Aβ和磷酸化Tau蛋白免疫组化染色结果显示：与同龄对照组相比，各脑缺血组Aβ和磷酸化Tau蛋白免疫染色在大鼠大脑皮层和海马中染色灰度值均显著降低，并且随着缺血时间的延长而逐渐降低。说明慢性脑缺血导致的脑慢性低灌注状态可以导致脑组织Aβ蛋白含量增加和Tau蛋白的过度磷酸化，进一步提示：脑慢性低灌注可以导致AD样病理变化。放射免疫检测结果显示：与同龄对照组相比，各脑缺血组大鼠血清NO水平较对照组均明显升高(P＜0.05)，表明慢性脑缺血可以增加血清Aβ含量。脑缺血16、20周组与脑缺血12周组相比，大脑皮层和海马中染色灰度值均显著增高(P＜0.05)；而脑缺血20周组与缺血16周组实验组相比，无统计学意义(P＞0.05)。 与同龄对照组相比，12周脑缺血组大鼠血清NO水平较对照组明显升高(P＜0.05)，而16周，20周脑缺血组的大鼠血清NO水平与其同龄对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。说明-Ⅰ-血清NO只是在大鼠脑缺血初期有改变，随着缺血时间的延长，逐渐恢复到正常水平。突触素免疫组化染色结果显示：12周、16周和20周各脑缺血组大鼠大脑皮层和海马中染色灰度值均较其同龄对照组显著增高(P＜0.05)，表明脑缺血明显抑制突触素的表达。脑缺血16、20周组与脑缺血12周组相比，大脑皮层和海马中染色灰度值均显著增高(P＜0.05)；而脑缺血20周组与缺血16周组实验组相比，无统计学意义(P＞0.05)。这提示慢性脑缺血能够引起大脑皮层和海马区突触数量减少。 结论：1.慢性脑缺血可以导致智力水平下降。2.慢性脑缺血可以使大脑皮层及海马Tau蛋白过度磷酸化和Aβ蛋白含量增加，此二者均为AD的特征性蛋白。3.我们的研究结果促使我们提出一个AD发病的工作假说：长期慢性脑缺血可能导致阿尔茨海默病的发生。4.脑组织突触素密度和血清一氧化氮浓度的的改变可能在慢性脑缺血所致的阿尔茨海默病的过程起一定的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文名称缩略表

创新点、进一步的研究

第一部分：脑慢性低灌注诱导的行为学，一氧化氮及其与阿尔茨海默特异性病理学变化的关系

第二部分：脑慢性低灌注诱导的行为学，突触素变化及其与阿尔茨海默特异性病理学变化的关系

结论

参考文献

附图

综述脑低灌注：阿尔茨海默病病因？

个人简历

致谢