不同波长光对体外培养人视网膜色素上皮细胞的影响

摘要

目的：长时间暴露于强光下可引起视网膜光损伤，尤其是其中蓝光部分。这种光化学损伤可累及光感受器细胞和视网膜的色素上皮细胞(RPE细胞)。以往的研究多着重于对光感受器细胞的研究，而视网膜色素上皮细胞对维持正常光感受器细胞的形态、功能具有重要作用。本文即从此入手，研究不同波长光照射对视网膜色素上皮细胞形态、功能影响，试从细胞生物学水平探讨视网膜光损伤的发病机制。 方法：酶消化法分离培养人RPE细胞，通过生长曲线的绘制、形态学和免疫学鉴定、透射电镜检查等方法分析RPE细胞的生物学特性；将人RPE细胞置于不同波长光线下培养，通过MTT法、透射电镜检查等研究不同波长光对人RPE细胞体外生长特性的影响。 结果： 第一部分： 1、人RPE细胞的培养和生长曲线：体外培养的人RPE细胞接种2小时后细胞开始贴壁生长，3天后细胞伸展，10天融合，传代细胞在3天左右融合。RPE细胞的生长曲线近“S”形，在传代后第一天细胞数略减少，经过2-3天的潜伏期后进入对数生长期，7天后达到生长稳定的平台期。 2、体外培养人的RPE细胞透射电镜：超微结构仍保持正常，细胞核呈椭圆形，核染色质均匀，较密集，胞浆细胞器丰富，有丰富的游离核糖体，线粒体、高尔基复合体、粗面内质网，色素含量很少，纵切面尚可见细胞顶端微绒毛、基底膜内褶及细胞间连接复合体(可能为紧密连接、桥粒、中间连接)等结构。 3、免疫学鉴定：免疫组织化学染色观察传代培养3-5代的人RPE细胞胞浆内表达细胞角蛋白(AE1/AE3)。 第二部分： 1、不同波长光对RPE细胞活性的影响：各种光照均使RPE细胞生长变慢，其中，蓝光下培养的细胞生长最慢(P<0.05)，依次为红光、白光，但二者之间差异不明显(P>0.05)，对照组增生最明显(P<0.05)(F=12.579，P<0.05)。 2、电镜结果显示：红光、白光组人RPE细胞与对照组相比超微结构无明显变化，胞浆内各种细胞器数目较多，结构正常，细胞核圆形，核染色质均匀。但蓝光组与其它各组比较有较大差异，其核染色质稀疏变淡，轻度水肿，胞浆内线粒体、粗面内质网、核糖体等细胞器均减少，进行性变小体增多，细胞界膜不清，有的界膜消失。 结论：不同波长光对体外培养的入视网膜色素上皮细胞形态、功能均造成影响，其中蓝光的影响强于红光和白光。

目录

声明

前 言

第一部分人视网膜色素上皮细胞体外培养及鉴定

1.2 结果

第二部分不同波长光对体外培养人视网膜色素上皮细胞的影响

2.1 材料和方法

2.2 结果

讨 论

结 论

参考文献

附 图

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致 谢