核转录因子-κB在实验性肝纤维化过程中的意义及水飞蓟宾抗肝纤维化作用机制的研究

摘要

[目的] 研究核转录因子-κB在实验性肝纤维化过程中在肝脏的表达、分布及意义，探讨肝纤维化的发病机制。 [方法] 雌性Wistar大鼠70只，体重相近(220g±20g)，随机分为正常组(n=6)、肝纤维化模型组(n=32)和PDTC组(n=32)，后两组各自又被随机分为1周，2周，4周和6周组(每组n=8)。PDTC组各组大鼠在给40％CCl4的同时给予PDTC(150mg/kg/d)灌胃。各组动物按设计在1周末、2周末、4周末和6周末实验结束时，用乙醚麻醉，在无菌无热源条件下，进行腹主动脉采血和肝组织取材。常规HE染色观察肝脏病变，天狼猩红胶原染色、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量测定观察肝纤维化程度，产色基质偶氮法鲎试剂定量测定血浆内毒素，赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)，TBA法检测肝组织丙二醛(MDA)的水平，免疫组化法测定NF-κB和ED2在各组肝脏中的表达，原位杂交和Western-blot检测肝纤维化过程中CTGF在肝脏的表达。 [结果] 肝纤维化模型组与正常对照组比较：(1)肝纤维化模型组血浆内毒素含量从第2周开始显著升高，以后呈递增趋势，于第6周时达最高值；肝组织NF-κB表达从第2周开始显著升高，呈递增趋势，6周时达最高；CTGF表达从第4周开始明显升高，第6周达最高，且两两都呈正相关，CTGF表达升高滞后于血浆内毒素含量升高；(2)免疫组化结果显示：NF-κBp65在正常肝组织中少量表达于中央静脉周围的肝细胞胞浆内，在模型肝组织可见程度不等的细胞质和(或)细胞核表达，主要分布于纤维化区、肝窦区、血管壁及部分胆管细胞、变性的肝细胞也可见阳性染色； ED2表达在正常对照组沿肝血窦少量散在分布，纤维化模型组阳性信号明显增多，主要分布在增生的纤维组织及纤维间隔，在肝实质内也有少量分布，阳性信号随着实验的进程呈递增趋势，且阳性细胞胞浆丰富、体积变大，外形为星形、多角形和不规则形。 PDTC组与模型组相比较：(1)血浆内毒素含从第2周末起，显著高于同期模型组，第4周达到最高值(P＜0.05)，第6周末开始回降，但仍显著高于正常对照组(P＜0.05)，与同期模型组无显著性差异；(2)肝组织NF-κBp65和CTGF表达显著低于同期纤维化模型组(P＜0.05)，且二者呈正相关(r=0.815，P＜0.01)；(3)PDTC组血浆内毒素含量与NF-κBp65和CTGF表达均无相关性；(4)ED2表达也明显减少。 [结论] 1．内毒素可能通过激活NF-κB通路上调CTGF的表达，从而加速肝纤维化的发生和发展。 2．内毒素可能通过NF-κB活化枯否氏细胞，从而参与肝纤维化的发生和发展。 3．PDTC有明显的抗肝纤维化作用。 [目的]观察水飞蓟宾(Silybinin)在大鼠实验性肝纤维化过程中抗肝维化作用及其可能的机制。 [方法]雌性Wistar大鼠70只，随机分为正常对照组(n=5)、肝纤维化模型组(n=33)和水飞蓟宾治疗组(n=32)，后两组各自再随机分为1周、2周、4周、6周组(n为6～11)。肝纤维化模型组以40％CCl4造成化学性肝损伤；水飞蓟宾治疗组注射40％CCl4的同时以水飞蓟宾50 mg/kg/d灌胃。各组动物(也包括正常对照组)按设计分别于给药后1周、2周、4周、6周末模型形成后，在乙醚麻醉、无菌无热源条件下，行腹主动采血和肝组织取材进行病理学观察。用Western-blot和原位杂交方法检测各组肝脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达；测定各组血浆内毒素(ET)含量，同时也测定羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平。 [结果]肝纤维化模型组和水飞蓟宾治疗组与正常对照组比较，各项指标均有显著升高，且ET含量升高先于CTGF；与肝纤维化模型组比较，水飞蓟宾治疗组肝脏病理学损伤性改变有明显的减轻，血浆ET、ALT水平以及肝组织MDA、Hyp含量均有显著的降低，CTGF表达也明显的下调。 [结论]水飞蓟宾可有效地改善实验性肝纤维化程度，其机制可能与其降低肠源性内毒素血症、下调CTGF的表达有关。

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论文说明：中英文缩略词表

声明

实验一核转录因子-κB在实验性肝纤维化过程中的表达及意义的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

实验二水飞蓟宾对大鼠实验性肝纤维化发生发展作用机制的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 致肝纤维化的关键因子—结缔组织生长因子的研究进展

附录

个人简介及在学期间发表的论文和参编的教材

致谢