妊娠期糖尿病患者血清特异性标志物筛选的初步研究

摘要

研究背景和目的:妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus GDM)是严重危害母婴健康的产科疾病，是妊娠期常见的并发症之一。虽经过多年的研究，该病的发病机制至今仍未完全阐明。由于GDM病因不明确，且无有效的治疗方法，所以早期筛查高危孕妇，适时监控高危人群，对减少该病的发生、降低孕产妇及围产儿死亡率显得尤为重要。但至今为止尚无特异性的血清标志物可作为GDM早期筛查指标。蛋白质组学是研究细胞或机体全部蛋白质的表达及其活动方式。蛋白质组学研究技术主要由双向凝胶电泳和生物质谱技术为支撑平台，生物信息学为桥梁，对蛋白质表达模式和蛋白组功能模式进行研究。蛋白质组学研究技术不仅可以发现特异性标志物，而且可以发现与疾病相关的多种方式组合的蛋白质谱。目前利用蛋白质组学研究技术已成功地发现了肝癌、淋巴母细胞瘤、食管癌、卵巢癌、宫颈癌等肿瘤、妊娠期高血压疾病以及阿耳茨海默病疾病的特异性标志物，而且在研究疾病的发病机制方面取得了可喜的突破。蛋白质组学的出现为我们研究GDM的发病机制和早期筛查提供了一个全新的方法和思路。本实验采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(Surface—Enhanced Laser Desorption/Ionization Timeof Flight—Mass Spectrometry，SELDI—TOF—MS)技术结合弱阳离子交换芯片CM10绘制GDM患者和正常孕妇血清蛋白质谱图，通过比较分析，筛选GDM的血清蛋白质特异性标志物，以期获得GDM早期筛查的血清学指标，同时期望获得疾病特异性相关蛋白，为我们深入研究该病的发病机制提供了新的方向。避免GDM和远期2型DM的发生。 材料和方法:收集2007年8月至2008年9月于山西医科大学第一医院住院的GDM患者及同期住院的正常孕妇静脉血3～4ml各30例(所取病例均排除影响血清蛋白质含量的其他疾病，如：内分泌疾病、妊娠合并高血压、妊娠合并肾炎、妊娠合并癫痫、低血糖昏迷、器官移植、输血等)。-80℃冰箱保存，用SELDI—TOF—MS技术结合弱阳离子交换芯片CM10绘制血清蛋白质谱图，筛选GDM的血清特异性标志物。比较上述两组血清蛋白质组差异，通过Ciphergen proteinchip3.2和Biomarker Wizard软件统计分析进行早期血清特异性标志物的筛选以及发病机制的探讨。 结果: GDM患者与正常妊娠孕妇的血清蛋白质谱图在质荷比(mass/charge，M/Z)为2000～20000 Da的范围内有明显差异。有5个不同质荷比蛋白质的相对含量有明显差异。GDM患者血清中，M/N比为2868.9、3448.3、5477.7的蛋白质相对含量(41.22±11.69)、(22.77±10.97)、(20.54±9.30)明显高于正常孕妇(9.34±5.60)、(10.42±6.23)、(8.26±3.84)，两者比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，而质荷比为4695.5、4786.7的蛋白质相对含量为(3.87±3.21)、(5.04±3.69)，均低于正常孕妇的(10.13±9.72)、(15.08±10.92)，分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论:在M/Z为2000～20000Da的范围内，GDM患者与正常孕妇的血清蛋白质组谱图有明显差异。根据实验结果，M/Z为2868.9、3448.3、5477.7、4695.5、4786.7的蛋白质组有望作为GDM的血清特异性标志物。为我们深入研究GDM的发病机制提供了新的方向。

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综 述 SELDI-TOF-MS技术及其在妇产科疾病研究中的应用

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