AMC与三种同类衍生物抗惊厥作用比较及对GABA和GABA受体ρ2mRNA表达的影响

摘要

目的：比较胺甲斑蝥素(AMC)、甲苯亚乙酰去甲斑蝥素(MANC)、氯苯亚甲酰胺去甲斑蝥素(CANC)、氯苯亚丁酰去甲斑蝥素(CBNC)的抗惊厥作用、毒性及其体存药效动力学。观察AMC对电刺激大鼠坐骨神经和青霉素(PNC)协同诱发痫性放电模型的对抗作用及对皮层脑电图(EcoG)、诱发电位(CEP)、γ-氨基丁酸(GABA)、ρ2mRNA和GABAc受体表达的影响。
　　 方法：(1)采用小鼠最大电休克(MES)和印防几毒素(PTX)惊厥模型，以丙戊酸钠(Valproate，VPA)为阳性对照，分析灌胃(ig)小鼠4种斑蝥素衍生物的惊厥潜伏期、抗惊厥率、量效和时效关系，比较各药的抗惊厥效能；按Bliss法计算抗MES的ED50，比较其效价强度；(2)采用转轮法，测定灌胃(ig)小鼠4种斑蝥素衍生物的中枢神经系统(CNS)毒性作用，按Bliss法计算TD50，比较各药的毒性；(3)采用药效法，运用数学模式及参数来模拟各药在体内的体存药效动力学过程；(4)建立电刺激坐骨神经和青霉素(PNC)协同诱发大鼠惊厥模型，VPA为阳性对照，以惊厥潜伏期和Racine痫性行为学分级作为评定药效指标，RM6240C型多道生物信号采集处理系统同步记录惊厥大鼠EcoG和CEP，分析ig AMC(22mg·kg-1，88mg·kg-1)的抗惊厥作用及对EcoG痫样波潜伏期、发放频率、最高振幅和CEP振幅的影响。(5)采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)中的SYBR GreenⅠ法检测皮层注射两种剂量AMC后海马区ρ2 mRNA的表达变化。(6)采用免疫组化技术，测定海马区GABA和GABAc受体蛋白量的变化。
　　 结果：(1)抗惊厥作用比较：AMC、MANC、CANC、CBNC、VPA均可剂量依赖性抗MES发作，AMC、CBNC、VPA抗惊率均达100％，MANC、CANC为90％;ED50值由小到大分别为VPA＜AMC＜MANC＜CANC＜CBNC；五种药物均可以延长PTX惊厥潜伏期，MANC、CANC、CBNC、VPA与PTX模型对照组相比有统计学意义(p＜0.01)，AMC与PTX模型对照组相比也有统计学意义(p＜0.05)，抗惊厥率由大到小依次为VPA＞CANC＞MANC＞CBNC＞AMC；(2)CNS毒性比较：4种斑蝥素衍生物的TD50值由大到小分依次为：AMC＞MANC＞CBNC＞CANC，均小于VPA,(3)体存药效动力学参数比较：各药的最小起效剂量由低到高为：VPA、AMC、CANC、MANC、CBNC；AMC约12min达峰，其他三药物均在药后50分钟左右达峰，而VPA于给药后3小时达峰；AMC的半效期达3小时左右，在五种药物中最大，药效持续作用时间与VPA的相似均在15小时左右，其他三种药物的半效期和作用持续时间均比AMC和VPA短；五种药物中AMC消除速率常数最小；(4)AMC两种剂量和VPA均能明显延长大鼠惊厥潜伏期，减轻青霉素诱发大鼠惊厥发作程度，与青霉素模型组比较均有显著性差异(P＜0.01)。同时可明显延长痫性放电潜伏期，减少相同时间内痫样波发放频率，降低最高振幅和诱发电位振幅，与青霉素模型组相比有显著性差异(P＜0.01)；(5)海马区ρ2 mRNA测定结果：青霉素模型组ρ2 mRNA表达量(0.65±0.09)较正常组(1.00±0.10)下降，有统计学意义(p＜0.05)；两种剂量AMC和VPA组表达量与青霉素模型组相比较均有明显升高，差别有统计学意义(p＜0.01)；(6)海马部位GABAc受体蛋白和GABA表达量各组比较：两种剂量AMC和VPA组大鼠海马区GABAc受体表达量较青霉素模型组升高，均有统计学意义(P＜0.01)；青霉素模型组GABA表达量较正常对照组减少，有统计学意义(p＜0.01)，两种剂量AMC和VPA组大鼠海马区GABA表达量较青霉素模型组明显升高，差别有统计学意义(p＜0.01)；
　　 结论：(1)AMC、MANC、CANC、CBNC、VPA均可抗MES和PTX惊厥发作。其中AMC，VPA和CBNC抗MES惊厥发作效能相似，AMC与VPA的效价强度相似而比其他三种衍生物大，但AMC抗PTX惊厥作用较弱；(2)AMC的TC50比其他三种衍生物大，而小于VPA，其中CANC的TC50值最小，说明其毒性最大;(3)AMC在五种药物中达峰时间最快、半效期和药效持续时间最长、消除最慢，最低起效剂量略大于VPA而小于其他三种衍生物。(4)AMC可对抗电刺激坐骨神经和青霉素协同诱发大鼠惊厥发作，抑制痫性放电和诱发电位振幅，产生显著抗惊厥作用。(5)AMC可以提高海马区的ρ2mRNA基因表达和GABAc受体蛋白含量，同时提高海马区GABA的含量。

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