大鼠肌肉挫伤后金属硫蛋白1A、2A mRNA时序性表达

摘要

目的：应用实时荧光定量PCR技术检测大鼠肌肉挫伤后骨骼肌金属硫蛋白1A、2AmRNA相对于管家基因核糖体蛋白L13 mRNA的表达量，探寻其时序性表达规律，探讨其表达变化与损伤时间的关系，旨为法医学早期损伤时间的推断提供科学依据。
　　 方法：选取健康SD大鼠60只，体重200g～250g。随机分成3组，包括：实验组(挫伤后0.5h、1h、6h、12h、18h、24h、30h、36h)、愈后组(挫伤后21d)和对照组，每个亚组6只。实验组和愈后组均实施麻醉、褪毛后，利用改进的自由落体装置，250g重力锤自150cm高度垂直自由落下，造成大鼠右后肢大腿内侧肌群挫伤。损伤后各时间点取挫伤处肌肉组织50mg，置于液氮中保存备用；对照组大鼠未打击造伤，其余处理与实验组及愈后组相同。以Promega公司的SV Total RNAIsolation System提取肌肉组织中的总RNA，逆转录合成cDNA第一条链，选取管家基因核糖体蛋白L13 mRNA为参比基因，利用SYBRGreenⅠ嵌合荧光法实时定量PCR检测MT1AmRNA和MT2AmRNA随损伤时间延长的表达量。
　　 结果：
　　 (1)大鼠骨骼肌挫伤后MT1AmRNA表达情况：挫伤后0.5h表达开始上调，18h达高峰为对照组的239倍，24小时下降为对照组的42倍，30小时再次升高达144倍，伤后21d其表达量仍为对照组的57倍。除0.5h外，其余各实验组MT1AmRNA表达量与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；相邻各实验组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 (2)大鼠骨骼肌挫伤后MT2A mRNA表达情况：挫伤后0.5h开始表达上调，18h达高峰为对照组的717倍，24小时下降为对照组的44倍，30小时再次升高达204倍，伤后21d其表达量仍为对照组的44倍。除0.5h外，其余各实验组MT1A mRNA表达量与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。相邻各实验组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 (3)大鼠骨骼肌挫伤后MT1A mRNA和MT2A mRNA表达量虽然不一样，但两者表达趋势一致，均为先急剧升高后急剧下降，并都出现二次升高，且随后缓慢下降，至伤后21d仍保持较高水平。
　　 结论：
　　 (1)大鼠肌肉挫伤后36h内MT1AmRNA和MT2AmRNA呈时序性表达趋势，与损伤时间有一定的关系，其时序性变化可望作为骨骼肌早期损伤时间推断的指标之一，服务于法医学实践。
　　 (2)MT1A mRNA和MT2A mRNA表达趋势整体一致，说明两者在抗损伤应答中的反应机制及所起作用相同，两者协同作用促进损伤愈合。
　　 (3)MT1A mRNA和MT2A mRNA在伤后21d表达量分别为对照组57倍和44倍，说明两者不仅在急性炎症期发挥抗损伤作用，在组织修复、重塑阶段也起着不可替代的生物学作用。

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综述：金属硫蛋白医学研究进展及法医学应用展望

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