骨髓增生异常综合征患者P15INK4B、FHIT基因甲基化的研究

摘要

研究目的:
　　 1.探讨P15INK4B基因和FHIT基因甲基化异常与骨髓增生异常综合征（MDS）发病机制的关系；
　　 2.分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者免疫表型的特征；
　　 3.分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者细胞免疫功能的表达特点。
　　 方法:
　　 选择50例骨髓增生异常综合征（MDS）患者和10例正常对照为研究对象，进行如下检测：
　　 1．甲基化PCR（methylation-specific PCR,MSP）检测P15INK4B基因和FHIT基因甲基化情况；
　　 2．变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)检测P15INK4B基因和FHIT基因甲基化情况；
　　 3．流式细胞仪检测MDS患者骨髓细胞免疫表型；
　　 4．流式细胞仪检测MDS患者淋巴细胞亚群；
　　 5．R 显带技术检测MDS患者染色体核型
　　 6．荧光原位杂交技术（FISH）检测MDS患者细胞遗传学情况。
　　 结果:
　　 1．根据国际预后积分系统（IPSS），将所有MDS患者分为低危组、中危-1组、中危-2组和高危组。低危组/中危-1组、中危-2组和高危组P15INK4B基因甲基化阳性率分别为15.4％、51.9％、70.0％，FHIT基因甲基化阳性率分别为7.7％、40.7％、60.0％，且P15INK4B基因和FHIT基因甲基化在三组间的差异有统计学意义（χ2=7.596,,P=0.022; χ2=7.285,P=0.026），其中低危组/中危-1组P15INK4B基因和FHIT基因甲基化阳性率低于高危组，且两组间的差异有显著性（P<0.05/3），而低危组/中危-1组与中危-2组、中危-2组与高危组间差异都无显著性；两个基因的甲基化没有关联性；
　　 2．随着MDS 疾病的进展，CD34+细胞比例逐渐升高，分别为：难治性贫血/环形铁粒幼细胞性难治性贫血（RA/RAS）7.43％，难治性贫血伴原始细胞增多（RAEB）36.81％，难治性贫血伴原始细胞增多转化型（RAEB-T）56.45％，且三组间及各组间的差异均有统计学意义（P<0.05）；髓系抗原CD33、CD13、HLA-DR表达逐渐增加，CD14、CD15抗原表达随着疾病的进展逐渐减少，三组间差异均有统计学意义（P<0.05）；B 淋巴细胞表面抗原CD19、CD10的表达随着疾病进展而减少；CD19抗原表达分别为3.05％、2.04％和1.05％，三组间差异有统计学意义（F=8.236，P=0.002），且各组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）；CD10抗原表达分别为9.95％、8.07％和3.67％，三组间差异有统计学意义（F=6.919，P=0.004），其中RA/RAS组与RAEB-T组、RAEB组与RAEB-T组之间差异有统计学意义（P<0.05）；T淋巴细胞表面抗原CD7表达随着疾病进展而增加，分别为RA/RAS 2.63％、RAEB 10.79％和RAEB-T 11.00％，三组间差异有统计学意义（P<0.05），其中RA/RAS组与RAEB组、RAEB-T组之间差异有统计学意义（P<0.05）。
　　 3．与正常对照组相比，MDS组的Th、Th/Ts、NK细胞的表达均减低，分别为37.09％、1.63％、10.26％，Ts细胞的表达增高，为25.49％；随着MDS 疾病的进展，RA/RAS、RAEB和RAEB-T组Th细胞的表达分别为33.08％、34.19％、46.58％，各组间差异无统计学意义；Ts细胞的表达分别为24.19％、28.69％、27.50％，其中只有RA/RAS组与RAEB组之间差异有统计学意义（P=0.027）；Th/Ts 比值分别为1.43、1.24、1.72，NK细胞的表达分别为8.41％、10.70％、11.29％。各组间Th、Th/Ts 比值、NK细胞的表达均无统计学意义。
　　 结论:
　　 1．P15INK4B基因和FHIT基因甲基化可能参与MDS的发病机制，并与疾病的恶化程度有关；
　　 2．检测MDS患者骨髓细胞的免疫表型有助于MDS的诊断、分型和判断预后，从而为治疗提供依据；
　　 3．MDS患者的细胞免疫功能紊乱，其中以Ts细胞异常表达最显著。

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综述 骨髓增生异常综合征相关基因的研究进展

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