利用SNPs进行唐氏综合征无创性产前诊断的可行性研究

摘要

为了探讨利用21号染色体上SNP （单碱基多态性， single-nucleotidepolymorphism SNP）位点进行唐氏综合征产前诊断的可行性,建立一种快速、准确、简便并适于推广至临床的唐氏综合征无创产前诊断方法。我们用不同的实验方法对21号染色体上的多个SNP 位点进行研究，以达到诊断唐氏综合征的目的，本研究包括以下两部分：
　　 第一部分：运用基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC 技术检测21号染色体数目的研究目的：建立一种基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC（变性高效液相色谱denaturing high performance liquid chromatography DHPLC）技术, 用于检测21号染色体的数目。
　　 方法：根据所研究靶SNPs 位点上下的碱基序列设计PCR 引物，优化PCR 反应及DHPLC的检测条件，根据DHPLC的色谱图对21号染色体的数目进行检测，分析DHPLC 色谱图中的四个峰高度之比若为1:1:1:1即为二倍体；四个峰高度之比为2:2:4:1或2:2:1:4 即为三倍体。
　　 结果：对27例已知基因型的DNA 标本（14例正常人标本，13例唐氏综合征标本）运用PCR-DHPLC 技术对21号染色体的数目做出检测。除3例唐氏综合征标本的靶SNPs 位点为纯合子不能做出诊断外，其余标本均与已知的基因型相吻合。
　　 结论：运用基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC 技术分析色谱图中的峰高比可用来检测21号染色体的数目，此方法准确，简便，快速，重复性好，但对于靶SNP位点为纯合子的标本则不能做出诊断，尚存在有局限性。
　　 第二部分：运用MLPA—AB3130技术检测21号染色体上PLAC4-SNPs的杂合度探讨其用于产前检测唐氏综合征的可行性。
　　 目的：应用多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probeamplification,MLPA)联合AB3130（高压毛细管电泳仪）检测21号染色体上PLAC4基因上的多个SNPs，研究其多态性，探讨应用PLAC4-SNPs 检测唐氏综合征的可行性。
　　 方法：检索出PLAC4基因上的94个SNPs 碱基序列，从中选出13个SNPs，根据SNPs上下的碱基序列合成探针，选用100例染色体核型分析结果正常的DNA 标本，应用MLPA—AB3130技术进行实验，研究其多态性情况。对于每个靶SNP 位点而言，电泳图谱中若出现双峰即为杂合子，出现单峰则为纯合子。
　　 结果：应用上述方法对100例正常DNA 标本做了检测，13个SNPs中Rs4818219，Rs8130833，Rs59066201，Rs9977003，Rs3804026的杂合度较高，分别为0.43；0.41；
　　 0.38；0.29；0.18。可进一步用于CffmRNA→cDNA→MLPA→AB3130检测唐氏综合征。
　　 结论：虽然本研究中所选用的正常DNA 标本存在有地域性，且样本量较少，但我们的研究结果为进一步利用CffmRNA-SNPs 进行无创产前诊断提供了依据，奠定了基础。因为按Lo等的理论，如果这5个SNPs 同时做为靶位点，其中只要有一个为杂合子即可对21三体的标本做出诊断。故将孕妇血中PLAC4基因胎盘特异表达的mRNA 先反转录为cDNA，再应用MLPA—AB3130技术检测SNPs 进行唐氏综合征产前诊断具有可行性和应用前景。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分运用基于异源双链生成的单管PCR-DHPLC 技术检测21 号染色体上SNPs 的研究

第二部分运用MLPA—AB3130 技术检测21 号染色体上PLAC4-SNPs 的杂合度探讨其用于产前检测唐氏综合征的可行性

小结

参考文献

文献综述运用孕妇外周血中游离核酸进行无创产前诊断唐氏综合征的研究进展

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