AG490、顺铂联合用药对上皮性卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡的影响及其作用机制的实验研究

摘要

目的：应用JAK 激酶抑制剂AG490与顺铂联合用药，探讨其对上皮性卵巢癌细胞SKOV3 增殖、凋亡的影响；同时检测癌基因STAT3及凋亡相关因子Survivin、Bcl-2 mRNA表达情况，探讨JAK 激酶抑制剂AG490阻断STAT3信号转导通路治疗卵巢恶性肿瘤的可行性与作用机制，为卵巢恶性肿瘤的治疗提供理论基础和实验依据。
　　 方法：
　　 1.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测24h、48h、72h 卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制率。
　　 对照组：加RPMI-1640培养液
　　 AG490组：20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L 三个浓度组
　　 顺铂组：20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL 三个浓度组
　　 联合组：20μmol/L、40μmol/L、80μmol/LAG490分别联合20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL 顺铂，共九组
　　 2.流式细胞仪检测48h SKOV3细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率，实验分组与MTT法分组相同。
　　 3.RT-PCR 法检测48h 卵巢癌细胞SKOV3的STAT3及Survivin、Bcl-2 mRNA表达情况。
　　 对照组：加RPMI-1640培养液
　　 AG490组：40μmol/L
　　 顺铂组：40μg/mL
　　 联合组：40μmol/L AG490联合40μg/mL 顺铂
　　 结果：
　　 1.AG490、顺铂及其联合用药对卵巢癌细胞SKOV3 增殖的影响
　　 单独应用AG490、顺铂均能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖，均随药物浓度和作用时间增加细胞增殖抑制率上升，具有浓度依赖性和时间依赖性。各时间组不同药物浓度比较细胞增殖抑制率有统计学差异（p<0.01），同一浓度组不同作用时间比较也有统计学差异（p<0.05）。联合用药组对细胞的增殖抑制率高于单独应用AG490、顺铂组（p<0.01），AG490与顺铂联合用药能显著提高对SKOV3细胞的杀伤力。各时间组不同浓度联合组比较细胞增殖抑制率有统计学差异（p<0.01），相同浓度联合组不同作用时间比较也有统计学差异（p<0.01），随药物浓度和作用时间增加细胞增殖抑制率上升，具有浓度依赖性和时间依赖性。
　　 2.AG490、顺铂及其联合用药对卵巢癌细胞SKOV3细胞凋亡的影响
　　 AG490、顺铂均能够促进卵巢癌SKOV3细胞凋亡，并随药物浓度的增加细胞凋亡率增加，具有浓度依赖性，差异具有统计学意义（p<0.01）。
　　 AG490与顺铂联合用药能够进一步促进卵巢癌SKOV3细胞凋亡，联合组对细胞的凋亡率高于单独应用AG490、顺铂组（p<0.01），不同浓度的联合组各组之间两两比较也有统计学差异（p<0.01），随药物浓度的增加细胞凋亡率增加，具有浓度依赖性。
　　 3.AG490、顺铂及其联合组的STAT3、Survivin及Bcl-2 mRNA的表达下调，与对照组比较，差异具有统计学意义（p＜0.01)，联合组的STAT3、Survivin及Bcl-2 mRNA表达低于单独应用AG490、顺铂组（p＜0.01)。
　　 结论：
　　 1.AG490可通过阻断STAT3信号途径抑制卵巢癌细胞STAT3的持续活化，抑制其增殖，诱导其凋亡，并具有浓度依赖性和时间依赖性。
　　 2.AG490诱导卵巢癌细胞发生凋亡，其作用机制可能与JAK/STAT3信号转导通路直接调控Survivin、Bcl-2等凋亡相关因子的表达有关。
　　 3.AG490与顺铂联合用药可使细胞增殖下降、凋亡上升，顺铂可能促进AG490阻断STAT3 活化，AG490可能增强化疗敏感性，两者协同作用可提高卵巢癌治疗效果。

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综述 AG490 在妇科恶性肿瘤中的研究进展

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