瘦素及脂联素对人乳腺癌细胞MCF-7与T47D增殖及凋亡的影响

摘要

目的：
　　 研究瘦素及脂联素对人乳腺癌细胞MCF-7与T47D 增殖、细胞周期以及凋亡所产生的影响，探讨瘦素、脂联素在乳腺癌发生发展中的作用。
　　 方法：
　　 （1）分别采用含10％与15％胎牛血清的RPMI-1640培养基体外培养MCF-7与T47D细胞。台盼蓝染色法计数细胞后，每24h在倒置显微镜下观察T47D细胞的生长情况，连续三天。
　　 （2）采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度瘦素作用24h、48h、72h对体外培养的MCF-7与T47D细胞增殖的影响。
　　 （3）采用碘化丙啶（PI）染色，流式细胞仪检测瘦素作用48h对MCF-7与T47D细胞周期的影响，脂联素作用48h对T47D细胞周期的影响。
　　 （4）采用Annexin V-FITC与PI 染色，流式细胞仪检测瘦素、脂联素作用24h对MCF-7与T47D细胞凋亡的影响。
　　 结果：
　　 （1）镜下观察，T47D细胞单层贴壁生长，呈不规则形，状态良好。细胞数量在72h内由刚传代后的(1.69±0.68)×105/ml 增加到(4.25±1.32)×105/ml。
　　 （2）25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml 瘦素作用24h、48h、72h，可以促进MCF-7细胞增殖，浓度与时间不存在交互作用（F=0.919，P=0.523），浓度及时间各自的主效应均有统计学意义（P 均<0.01）。多重比较结果显示200ng/ml及400ng/ml 瘦素组与对照组相比有统计学差异（P 均<0.01）。其中400ng/ml作用72h后细胞增殖率最高（16.6％）。不同时间段多重比较均有统计学差异（P 均<0.01）。
　　 （3）相同浓度瘦素作用24h、48h、72h 可以促进T47D细胞增殖，浓度与时间不存在交互作用（F=0.620，P=0.787），浓度及时间各自的主效应均有统计学意义（P 均<0.01）。
　　 多重比较结果显示200ng/ml及400ng/ml 瘦素组与对照组相比有统计学差异（P 均<0.05）。
　　 其中400ng/ml作用48h后增殖率最高（21.75％）。不同时间段多重比较也均有统计学差异（P 均<0.01）。
　　 （4） 100ng/ml、400ng/ml 瘦素作用48h后MCF-7细胞G0/G1期比例分别为（60.26±2.26）％、（54.72±2.55）％，与对照组（63.94±0.81）％相比有统计学差异（F=10.464，P=0.044）；S 期比例分别为（32.24±0.94）％、（36.62±0.75）％，与对照组（29.97±0.04）％相比也有统计学差异（F=47.361，P=0.005）；G2/M 期变化无统计学差异（F=1.77，P=0.311）。
　　 同样浓度瘦素作用后T47D细胞G0/G1期、S 期、G2/M 期的变化无统计学差异(P 均>0.05)。
　　 （5）500ng/ml、2000ng/ml 脂联素作用48h后，T47D细胞的G0/G1期比例分别为（91.07±0.63）％、（91.60±0.98）％，与对照组（85.31±1.07）％相比有统计学差异（F=29.277，P=0.011）；S 期、G2/M 期的变化均无统计学差异(P>0.05)。
　　 （6）100ng/ml、400ng/ml 瘦素作用24h后MCF-7细胞的早期凋亡率和总凋亡率的改变均无统计学差异(P>0.05)；T47D细胞的早期凋亡率分别为（1.77±0.47）％、（1.08±0.03）％，与对照组（6.54±1.27）％相比有统计学差异（F=28.213，P=0.011）；总凋亡率分别为（2.13±0.74）％、（1.55±0.16）％，与对照组（7.48±1.39）％相比有统计学差异（F=25.642，P=0.013）。
　　 （7）500ng/ml、2000ng/ml 脂联素作用24h后，MCF-7细胞早期凋亡率与对照组相比无统计学差异(P>0.05)，总凋亡率分别为（17.20±0.31）％、（16.25±0.29）％，与对照组（12.61±0.62）％相比有统计学差异（F=62.049，P=0.004）。同样浓度脂联素作用后T47D细胞早期凋亡率与总凋亡率的变化均无统计学差异(P>0.05)。
　　 结论：
　　 （1）瘦素能够促进乳腺癌细胞MCF-7与T47D 增殖。
　　 （2）瘦素可使MCF-7细胞由G0/G1期向S 期推进，促进DNA 合成，抑制T47D细胞凋亡。提示瘦素可能在乳腺癌发展中发挥促进作用。
　　 （3）脂联素可将T47D细胞阻滞于G0/G1期，抑制DNA 合成，促进MCF-7细胞的中晚期凋亡。提示脂联素可能是乳腺癌发展的保护因素之一。

目录

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前言

第一章材料与方法

第二章结果

第三章讨论

结论、研究特色

参考文献

综述女性乳腺癌危险因素研究

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