同种异体软骨细胞-Ⅰ/Ⅲ胶原膜修复兔膝关节软骨缺损的研究

摘要

研究目的：
　　 ①体外构建负载有兔软骨细胞的。Ⅰ/Ⅲ型胶原膜复合物，并观察兔软骨细胞在支架内三维立体培养的分布、生长情况。
　　 ②对比观察单纯Ⅰ/Ⅲ型胶原膜、体外培养好的同种异体软骨细胞—Ⅰ/Ⅲ型胶原膜支架复合物分别修复兔膝关节软骨缺损模型的效果。
　　 研究方法：
　　 ①新西兰白兔软骨细胞分离、培养：2周龄新西兰白兔1只，耳缘静脉空气栓塞处死动物，无菌条件下剖取双侧膝关节，锐刀刮取膝关节股骨和胫骨平台全层软骨，酶消法分离软骨细胞后，根据计数以1×105/ml分装在25ml培养瓶中，每瓶5ml，传至2代即可。每天在倒置显微镜下细胞的生长情况；细胞爬片3日后HE染色、蕃红O染色、Ⅱ-型胶原免疫组化。
　　 ②兔软骨细胞-Ⅰ/Ⅲ型胶原复合物体外构建与培养：选择生长状态良好的第2代细胞消化离心，用含20％胎牛血清的DMEM液配制成浓度为6×106/ml的细胞悬液，滴入Ⅰ/Ⅲ型胶原膜中。培养3天后进行有关检测：倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况；HE染色、蕃红O染色、Ⅱ-型胶原免疫组化。
　　 ③体内试验：4月龄兔子麻醉后在双侧膝关节股骨滑车造直径3.8mm深2mm的全层软骨缺损，随机分成两组：对照组植入Ⅰ/Ⅲ型胶原，移植组植入同种异体软骨细胞-Ⅰ/Ⅲ型胶原复合体。术后8周、12周各处死动物6只观察膝关节软骨缺损修复效果：大体标本观察；组织学HE染色、蕃红O染色及Ⅱ-型胶原免疫组化；采用半定量评分表评价修复效果。
　　 结果：
　　 软骨细胞能够贴附在Ⅰ/Ⅲ胶原膜表面，并表现出典型的球状立体结构，同种异体软骨细胞移植组6周时即可表现出类透明样软骨，Ⅱ-型胶原免疫组化染色呈阳性，12周时的修复组织为类透明软骨组织，软骨和软骨下骨重塑，新生组织的Ⅱ-型胶原免疫组化染色呈强阳性。对照组6周和12周时缺损处均为纤维组织修复，Ⅱ-型胶原免疫组化染色呈阴性。移植组的半定量组织学评分显著高于对照组(P＜0.01)。
　　 结论：
　　 研究表明同种异体兔软骨细胞复合Ⅰ/Ⅲ型胶原膜能有效的提高兔膝关节全层软骨缺损的修复，避免了自体软骨细胞移植的繁琐过程，扩展了软骨细胞的来源，有望为临床治疗关节软骨缺损提供新的方法。

目录

声明

缩略词表

前言

材料和方法

1.器材、试剂和动物

2.实验方法

结果

1.软骨细胞的分离和培养:

2.软骨细胞与Ⅰ/Ⅲ型胶原膜复合物的构建

3.大体结果:

4.组织学分析

5.统计分析

讨论

结论

参考文献

综述

个人简介

致谢