Intermedin对缺氧复氧所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

摘要

目的：
　　 通过培养Intermedin(IMD)质粒转染后的大鼠H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型，证实IMD对心肌细胞的H/R氧化应激损伤具有保护作用，为研究IMD基因对心血管疾病的作用及分子生物学机制奠定基础。
　　 方法：
　　 实验分为四组：
　　 1）正常对照组：用DMEM培养基培养H9c2心肌细胞48h;
　　 2)H/R组：常规培养H9c2心肌细胞48h后，用5mmol/l的连二亚硫酸钠使其缺氧2h，后用DMEM培养基复氧lh;
　　 3)H/R+空质粒组（空质粒组）：pIRES2-EGFP质粒（即空质粒）转染后稳定培养48h，之后给予缺氧/复氧处理；
　　 4)H/R+IMD质粒组（IMD质粒组）：PIRES2-EGFP/IMD质粒（即IMD质粒）转染后稳定培养48h，之后给予缺氧/复氧处理。实验终止后，在倒置相差显微镜下观察H9c2心肌细胞形态；质粒转染后48h，在荧光显微镜下观察心肌细胞形态；通过流式细胞仪检测细胞转染效率以确定质粒的最佳转染量；采用化学比色法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(IDH)的释放；用硫代巴比妥酸显色法测定细胞上清液中丙二醛(MDA)含量；用黄嘌呤氧化酶法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性；运用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。
　　 结果：
　　 (l)倒置相差显微镜下观察H9c2心肌细胞为长梭形，呈鱼群状或漩涡状排列，贴壁紧密；
　　 (2)荧光显微镜下观察心肌细胞胞浆内呈现绿色荧光，呈长梭形，贴壁生长；
　　 (3)终浓度为lug/ml的质粒细胞转染效率最高；
　　 (4)与正常对照组相比，H/R组细胞上清液中LDH含量增加，MDA含量增加，SOD活性下降（p均＜0.05）；IMD质粒的转染显著逆转了上述这些指标的变化，与H/R组相比具有显著差异(p＜0.05)；空质粒组与H/R组相较，各指标测定值无统计学差异(p＞0.05)；
　　 (5)与正常对照组相比，H/R组细胞凋亡率（中晚期）显著增加(p＜0.05)，IMD质粒组细胞凋亡率（中晚期）较H/R组有所下降(p＜0.05)；空质粒组与HR组相较则无统计学差异(p＞0.05)；
　　 结论：
　　 (1)H/R可诱导心肌细胞氧化应激损伤和凋亡；
　　 (2)IMD基因可通过质粒转染的方法进入细胞发挥作用；
　　 (3)IMD可通过减轻氧化应激，抑制细胞凋亡，对心肌细胞H/R损伤起到保护作用；

目录

声明

前言

材料与方法

1 主要试剂与材料

2 方法

3 统计学处理

结果

1.H9c2心肌细胞形态学观察:

2.流式细胞仪检测质粒转染效率:

3.各组心肌细胞上清液中LDH活性的比较:

4.各组心肌细胞上清液中MDA含量的比较:

5.各组心肌细胞上清液中SOD活性的比较:

6.流式细胞术所测各组心肌细胞凋亡率结果:

讨论

结论

参考文献

附图

综述

附录

个人简介

致谢